黑龍江野生黑木耳種質(zhì)資源的SSR分析
發(fā)布時(shí)間：2020-12-19 13:33
黑木耳味道鮮美,營(yíng)養(yǎng)豐富,是我國(guó)主要的食用菌之一。黑龍江作為我國(guó)黑木耳的主產(chǎn)區(qū)之一,具有得天獨(dú)厚的地理環(huán)境,孕育有豐富的野生黑木耳種質(zhì)資源。本實(shí)驗(yàn)對(duì)黑龍江野生黑木耳種質(zhì)資源進(jìn)行一個(gè)初步的探究,為新菌種的篩選馴化培育工作提供一定的理論依據(jù)；對(duì)于全面了解黑龍江地區(qū)的黑木耳種質(zhì)資源以及搜集保存野生黑木耳菌株具有重要意義；此外,從分子水平上對(duì)于新菌種的知識(shí)產(chǎn)權(quán)保護(hù),加強(qiáng)菌種監(jiān)管等方面有一定的理論意義。本實(shí)驗(yàn)主要有以下結(jié)果：（1）從黑龍江地區(qū)采集并分離純化培養(yǎng)后共獲得31株野生黑木耳菌株。（2）對(duì)分離獲得的菌株進(jìn)行菌絲體培養(yǎng)后進(jìn)行菌絲基因組DNA提取,利用基礎(chǔ)PCR（Polymerase Chain Reaction聚合酶鏈反應(yīng)）反應(yīng)體系篩選出22對(duì)SSR（Simple Sequence Reapt微衛(wèi)星序列）引物,然后對(duì)SSR-PCR反應(yīng)體系進(jìn)行了相關(guān)的優(yōu)化實(shí)驗(yàn)。共獲得條帶位點(diǎn)103個(gè),其中102個(gè)多態(tài)性位點(diǎn),多態(tài)性位點(diǎn)比例高達(dá)99%,每對(duì)引物檢測(cè)出多態(tài)性位點(diǎn)1-10個(gè),引物的PIC （Polymorphism Information Content引物多樣性指數(shù)）值為0.47-0.91之間,...
【文章來源】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校
【文章頁數(shù)】：68 頁
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
黑木耳生活史Fig.1-1LifecycleofAuriculariaauricula1.1.3黑木耳應(yīng)用價(jià)值
不足之處是栽培周期較長(zhǎng)，需2?3年。主要分為段木栽培前準(zhǔn)備，人工接種與發(fā)菌期管理，出耳采收及越冬管理等過程，詳細(xì)工藝流程如圖1-2。栽培期確定砍樹一剔枝截段令架曬 #人工接種￠1菌種選擇 Mr加工!fc藏 越冬管理 h堆發(fā)菌I ^^采收 管理 起架 ? 清場(chǎng)搭棚 ? 排場(chǎng)圖1-2黑木耳段木栽培流程Fig. 1-2 Auricularia auricula wood cultivation process(2)代料栽培隨著社會(huì)的發(fā)展，科技的進(jìn)步，20世紀(jì)70年代我國(guó)開始進(jìn)行代料栽培黑木耳的研宄丨黑木耳代料栽培具有原料來源廣泛、周期短、產(chǎn)量高、效益好等特點(diǎn)，且可節(jié)省木材，不受地域限制，現(xiàn)已在黑龍江、吉林等省份廣泛推廣。代料栽培黑木耳可分塑料袋栽和瓶栽兩種。兩者在配料、接種、出耳管理等方面基本相似。1)栽培季節(jié)：代料栽培黑木耳一年可安排兩季，即春季和秋季。2)栽培場(chǎng)所：栽培場(chǎng)所選在室內(nèi)或室外均可，室內(nèi)栽培對(duì)溫度，濕度，通氣等條件容易控制，但要注意通風(fēng)滿足黑木耳對(duì)氧氣的需求并增加光照。另外，耳棚附近應(yīng)供水方便，環(huán)境衛(wèi)生。3)培養(yǎng)料配制：代料栽培黑木耳的原料很多，主要的有棉籽殼，雜木屑，稻草，玉米芯等
3.1菌種分離本實(shí)驗(yàn)對(duì)采集到的野生菌種材料全部進(jìn)行了分離，獲得31株原始菌株。采用內(nèi)部組織挑取分離的方法而未使用耳片組織切塊的方法，從耳片內(nèi)部挑取菌絲組織，避免了因?yàn)槎獠繋Ь斐删攴蛛x失敗，分離的菌絲組織經(jīng)過培養(yǎng)都獲得了相應(yīng)的純菌，純化培養(yǎng)成一級(jí)菌種。一級(jí)菌種經(jīng)過三角瓶液體接種培養(yǎng)均獲得了大量的菌絲體，通過紗布過濾、濾紙吸水、烘箱供干后獲得含水量較少的菌絲，適于進(jìn)行基因組DNA提取，于一2(rC保存?zhèn)溆谩?.2基因組DNA提取采用改良的SDS方法從供試菌株中提取DNA，取樣加適量Loading Buffer釆用丨％瓊脂糖凝膠電泳，160V (5V/cm)電壓電泳30min左右，于凝膠成像儀下觀察并保存圖象，部分菌株樣品提取效果見圖3-1，圖中1?28為表1-1中菌株編號(hào)；M為DL2000 Marker。瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果顯示條帶清晰，整齊，無拖尾、彌散等現(xiàn)象，說明提取的DNA比較純，基本無降解，效果較好，符合實(shí)驗(yàn)要求，可以進(jìn)行后續(xù)PCR實(shí)驗(yàn)。
本文編號(hào)：2925992
【文章來源】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校
【文章頁數(shù)】：68 頁
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
黑木耳生活史Fig.1-1LifecycleofAuriculariaauricula1.1.3黑木耳應(yīng)用價(jià)值
不足之處是栽培周期較長(zhǎng)，需2?3年。主要分為段木栽培前準(zhǔn)備，人工接種與發(fā)菌期管理，出耳采收及越冬管理等過程，詳細(xì)工藝流程如圖1-2。栽培期確定砍樹一剔枝截段令架曬 #人工接種￠1菌種選擇 Mr加工!fc藏 越冬管理 h堆發(fā)菌I ^^采收 管理 起架 ? 清場(chǎng)搭棚 ? 排場(chǎng)圖1-2黑木耳段木栽培流程Fig. 1-2 Auricularia auricula wood cultivation process(2)代料栽培隨著社會(huì)的發(fā)展，科技的進(jìn)步，20世紀(jì)70年代我國(guó)開始進(jìn)行代料栽培黑木耳的研宄丨黑木耳代料栽培具有原料來源廣泛、周期短、產(chǎn)量高、效益好等特點(diǎn)，且可節(jié)省木材，不受地域限制，現(xiàn)已在黑龍江、吉林等省份廣泛推廣。代料栽培黑木耳可分塑料袋栽和瓶栽兩種。兩者在配料、接種、出耳管理等方面基本相似。1)栽培季節(jié)：代料栽培黑木耳一年可安排兩季，即春季和秋季。2)栽培場(chǎng)所：栽培場(chǎng)所選在室內(nèi)或室外均可，室內(nèi)栽培對(duì)溫度，濕度，通氣等條件容易控制，但要注意通風(fēng)滿足黑木耳對(duì)氧氣的需求并增加光照。另外，耳棚附近應(yīng)供水方便，環(huán)境衛(wèi)生。3)培養(yǎng)料配制：代料栽培黑木耳的原料很多，主要的有棉籽殼，雜木屑，稻草，玉米芯等
3.1菌種分離本實(shí)驗(yàn)對(duì)采集到的野生菌種材料全部進(jìn)行了分離，獲得31株原始菌株。采用內(nèi)部組織挑取分離的方法而未使用耳片組織切塊的方法，從耳片內(nèi)部挑取菌絲組織，避免了因?yàn)槎獠繋Ь斐删攴蛛x失敗，分離的菌絲組織經(jīng)過培養(yǎng)都獲得了相應(yīng)的純菌，純化培養(yǎng)成一級(jí)菌種。一級(jí)菌種經(jīng)過三角瓶液體接種培養(yǎng)均獲得了大量的菌絲體，通過紗布過濾、濾紙吸水、烘箱供干后獲得含水量較少的菌絲，適于進(jìn)行基因組DNA提取，于一2(rC保存?zhèn)溆谩?.2基因組DNA提取采用改良的SDS方法從供試菌株中提取DNA，取樣加適量Loading Buffer釆用丨％瓊脂糖凝膠電泳，160V (5V/cm)電壓電泳30min左右，于凝膠成像儀下觀察并保存圖象，部分菌株樣品提取效果見圖3-1，圖中1?28為表1-1中菌株編號(hào)；M為DL2000 Marker。瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果顯示條帶清晰，整齊，無拖尾、彌散等現(xiàn)象，說明提取的DNA比較純，基本無降解，效果較好，符合實(shí)驗(yàn)要求，可以進(jìn)行后續(xù)PCR實(shí)驗(yàn)。
本文編號(hào)：2925992
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