一、人類白細胞抗原一G(HLA—G)HLA—G是人類主要組織相容性復合體，屬非經(jīng)典性人類白細胞抗原I類基因，由8個外顯子和7個內(nèi)含子組成。HLA—G蛋白有4個膜結(jié)合性亞型(HLA—G1、G2、G3、G4)和3個可溶性亞型(HLA一05、G6、G7)。與經(jīng)典性人類白細胞抗原不同，HLA-G分子多態(tài)性有限，只存在有限數(shù)量的等位基因。HLA—G 高度選擇性地在母胎界面組織表達，主要分布在絨毛外細胞滋養(yǎng)層。母體對胚胎的免疫耐受以及早期胚胎細胞生長發(fā)育和著床是妊娠成功的兩個關鍵的因素。近年的研究認為，HLA—G可能與早期胚胎的生殖免疫學和生殖生物學過程密切相關。

　　二、HLA—G在早期胚胎的表達1996年，Jurisicova等 首次發(fā)現(xiàn)，人胚胎的卵裂期、桑葚期胚胎及囊胚均有HLA—G 的表達，還發(fā)現(xiàn)HLA-G表達胚胎的卵裂率增加。我們的進一步研究發(fā)現(xiàn)，人類著床前胚胎表達HLA—G的各個亞型，不同的階段和不同的胚胎存在表達差異，囊胚內(nèi)細胞團不表達HLA—G蛋白，滋養(yǎng)層細胞則表達HLA-G蛋白。我們通過檢測胚胎干細胞的HLA—G 表達，也證實了胚胎內(nèi)細胞不表達HLA—G。2002年，F(xiàn)uzzi等通過檢測體外受精(IVF)胚胎培養(yǎng)液發(fā)現(xiàn)，人胚胎在4～8細胞階段分泌可溶性HLA—G(silLA—G)，這一分泌與IVF胚胎的成功著床密切相關。HLA—G在早期胚胎的表達顯示其在胚胎早期生長發(fā)育和著床上可能發(fā)揮作用。

　　三、HLA—G與胚胎生長發(fā)育和著床相關性的臨床研究近年來，我們開展了sHLA—G與IVF／ICSI結(jié)局相關性的多中心回顧性臨床研究，探討HLA—G在胚胎生長發(fā)育和著床中的作用。共檢測了全國九家生殖醫(yī)學中心924個IVF周期的2，041份胚胎培養(yǎng)液。結(jié)果顯示，25．5 (521份)檢測到sHLA-G表達。sHLA—G陽性胚胎移植周期的臨床妊娠率和胚胎種植率均高于陰性周期(53．9 vs．37．3 ；32．5 vs．23．0 )(P< 0．05)。妊娠相關因素的Logistic多元回歸分析顯示，sHI A—G 陽性表達與IVF／ICSI妊娠結(jié)局呈正相關關系(未發(fā)表資料)。

　　此后，我們進一步開展了silLA—G 與IVF／ICSI結(jié)局相關性的前瞻性、隨機對照臨床研究。實驗組在凍融胚胎移植(FET)周期中移植sHLA—G陽性胚胎，臨床妊娠率66．7%(29／43)，種植率41．3%(38／92)；而對照組在FET 周期中移植sHLA—G陰性胚胎，臨床妊娠率50．0%(38／76)，種植率30．3%(56／185)。結(jié)果顯示，sHLA—G 陽性胚胎有較高的臨床妊娠率和種植率(未發(fā)表資料)。近年來，國際上的相關研究也顯示，分泌sHLA—G的胚胎的IVF／ICSI臨床妊娠率和種植率較高。我們對近1O年來sHLA—G 與IVF／ICSI結(jié)局相關性研究進行了Meta分析。共檢索分析了418篇文獻，納入15篇文獻進行Meta分析，研究對象共4，824例。結(jié)果顯示：與silLA—G 陰性組相比，silLA—G 陽性組種植率、妊娠率和活產(chǎn)率有所提高，合并效應統(tǒng)計量OR依次為：3．19(95 CI：1．30—7．81，P一0．01)、4．43(95％CI：2．85—6．89，P一0．00)和2．47(95 CI：1．21—5．05，P一0．01)，差異均具有統(tǒng)計學意義(未發(fā)表資料)。因此，我們認為胚胎sHI A—G檢測陽性與IVF／ICSI較好的臨床結(jié)局相關。但是，sHLA—G與IVF／ICSI妊娠結(jié)局間的相關性仍需更精確的檢測技術和進一步的分子機制研究。

　　四、HLA—G在胚胎生長發(fā)育和著床中作用的分子機制研究為了進一步研究HLA—G在早期胚胎中作用的相關分子機制，我們構(gòu)建了RNAi腺病毒載體轉(zhuǎn)染人滋養(yǎng)細胞降調(diào)節(jié)HLA—G模型，筆耕論文新浪博客，采用自然殺傷細胞毒試驗觀察滋養(yǎng)細胞對自然殺傷細胞的耐受。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，HLA—G降調(diào)節(jié)后，滋養(yǎng)細胞的免疫耐受下降，提示了HI A～G 在母胎免疫耐受中的可能作用_5j。通過HLA—G在胚胎干細胞的過表達和免疫耐受研究，進一步證實了HLA—G所具有的免疫耐受作用。滋養(yǎng)細胞的粘附和浸潤是早期胚胎著床和胎盤形成的關鍵環(huán)節(jié)。采用滋養(yǎng)細胞HLA—G降調(diào)節(jié)模型，我們進一步研究了HLA—G對細胞粘附和浸潤的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，HLA—G降調(diào)節(jié)后，滋養(yǎng)細胞的粘附和浸潤能力下降。因此，HLA—G有可能參與胚胎著床相關的粘附和浸潤過程。我們采用HLA—G小干擾RNA腺病毒載體轉(zhuǎn)染卵裂期人胚胎，發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染胚胎的卵裂率和囊胚形成率下降，顯示HLA—G可能與胚胎的生長發(fā)育相關。

　　為進一步研究sHLA—G在胚胎生長和著床中的分子機制，我們構(gòu)建了sHLA—G原核細胞表達體系，并采用蛋白重構(gòu)試劑盒將重組蛋白sHLA—G純化及重構(gòu)。采用sHLA—G重組蛋白和滋養(yǎng)層細胞與子宮內(nèi)膜細胞共培養(yǎng)體外模型，我們研究了silLA—G對滋養(yǎng)細胞和子宮內(nèi)膜細胞粘附的影響，發(fā)現(xiàn)sHLA—G促進滋養(yǎng)細胞與子宮內(nèi)膜細胞的粘附。應用微量蛋白熒光標記重組sHLA蛋白，與子宮內(nèi)膜細胞共培養(yǎng)，采用流式細胞儀檢測sHLA—G與子宮內(nèi)膜細胞的特異性結(jié)合能力，結(jié)果發(fā)現(xiàn)sHLA—G與子宮內(nèi)膜細胞特異結(jié)合。進一步采用PCR檢測顯示，子宮內(nèi)膜細胞表達HLA—G 受體KIR2DL4。

　　人絨毛膜促性腺激素(HcG)由滋養(yǎng)細胞分泌，在早期妊娠的發(fā)生和維持中發(fā)揮重要作用。我們研究了HLA—G對滋養(yǎng)細胞生成J3一HCG 的作用及其可能調(diào)控機制。采用小干擾RNA轉(zhuǎn)染HI A-G表達陽性的JEG-3滋養(yǎng)細胞，建立HLA—G降調(diào)節(jié)滋養(yǎng)細胞模型；構(gòu)建HLA—G 慢病毒載體，感染HLA—G表達陰性的BeWo滋養(yǎng)細胞 ，建立穩(wěn)定表達HLA—G的滋養(yǎng)細胞模型。通過檢測過表達和降調(diào)節(jié)HLA-G細胞系B—HCG水平顯示，HLA—G促進l3一HCG的表達。進一步的研究還顯示，HLA—G對8一HCG的調(diào)控是通過MEK1／2信號傳導通路。

　　HLA—G在早期胚胎的調(diào)控機制研究對于闡明其在胚胎生長發(fā)育和著床的作用具有意義。白血病抑制因子(LIF)是重要的胚胎種植相關因子。我們研究了LIF對HLA—G的調(diào)控機制。采用流式細胞技術和Western blot，我們發(fā)現(xiàn)LIF促進滋養(yǎng)細胞表達HLA—G，這一調(diào)控作用呈時間和劑量依賴型(未發(fā)表資料)。而這一調(diào)控是通過MARK信號傳導通路完成。我們近年的研究還顯示，microRNA在滋養(yǎng)細胞HLA—G的調(diào)控中發(fā)揮作用。在陽性表達HLA-G 的滋養(yǎng)細胞系JEG一3中過表達miR一152，導致HLA—G的表達下降，NK細胞介導的細胞溶解增加。這一結(jié)果提示，miR一152具有降調(diào)節(jié)HLA—G的作用[Io3。

　　綜上所述，HLA—G在早期胚胎的表達、功能和分子機制研究顯示，HLA—G在人類早期胚胎的生長、發(fā)育、著床等環(huán)節(jié)上起重要作用。HIA—G有可能成為胚胎生長和著床潛能檢測的標志性分子。

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