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靶向SR-A相變納米粒診療動脈粥樣硬化易損斑塊的實驗研究

發(fā)布時間:2020-11-22 01:02
   目的:易損的動脈粥樣硬化(AS)斑塊容易突然破裂,導致致命事件,嚴重危害人類健康和生命。本研究將制備一種高效、靈敏、特異性強的集診斷與治療于一體的多模態(tài)納米粒,實現(xiàn)在體、無創(chuàng)性早期識別動脈粥樣硬化易損斑塊,并在分子水平進行早期治療AS易損斑塊。方法:用改良的雙乳化法和靜電吸附作用構建靶向動脈粥樣硬化斑塊巨噬細胞表面的A類清道夫受體(SR-A),能夠早期診斷病變的多模態(tài)納米粒(Fe-PFH-PLGA/CS-DS)。利用粒徑電位儀、透射電鏡、原子吸收光譜儀、傅里葉紅外儀、激光共聚焦顯微鏡、流式細胞儀對納米粒進行理化性質的表征,確定靶物質的連接。對此探針行超聲及核磁體外成像,分析其顯影性能。培養(yǎng)小鼠巨噬細胞RAW264.7,初步評價納米粒對體外巨噬細胞的靶向性,用CCK-8法分析其細胞毒性。建立載脂蛋白E(ApoE)敲除(KO)(apoE-/-)小鼠動脈粥樣硬化易損斑塊模型,通過病理學、免疫組化法對易損斑塊中SR-A的表達進行分析,探討其用于靶向診斷動脈粥樣硬化易損斑塊的可行性及準確性。研究納米粒在體內的生物毒性,核磁成像的可行性以及聯(lián)合低能聚焦超聲(LIFU)在體內外相變消融斑塊的潛能。結果:采用雙乳劑法和靜電吸附法在溫和條件下成功制備了靶向活化巨噬細胞表面SR-A的Fe-PFH-PLGA/CS-DS納米粒。該納米粒能夠通過LIFU輻照進行相變,實現(xiàn)超聲成像;高載鐵率對磁共振成像具有良好的負增強作用。納米粒對活化的巨噬細胞具有高親和力,被巨噬細胞內吞后在LIFU輻照下通過聲致相變(ADV)效應誘導細胞凋亡。此外,在由高膽固醇誘導的apoE-/-小鼠的離體動脈粥樣硬化斑塊模型中,納米粒選擇性地積聚在主動脈巨噬細胞上表達的SR-A位點的區(qū)域。該結果也通過體內MRI證實,其中納米?梢园邢蛑鲃用}斑塊并減少T_2~*信號,隨后LIFU誘導的相變可導致體內斑塊上巨噬細胞的凋亡。結論:本研究制備了一種新型的靶向動脈粥樣硬化易損斑塊SR-A的多模態(tài)多功能納米粒(Fe-PFH-PLGA/CS-DS),應用超聲及核磁分子顯像技術實時監(jiān)控評估斑塊狀況,有望能夠對動脈粥樣硬化易損斑塊進行特異性診斷和靶向治療。
【學位單位】:重慶醫(yī)科大學
【學位級別】:碩士
【學位年份】:2019
【中圖分類】:R543.5;R445.2
【部分圖文】:

示意圖,納米粒,靶向,巨噬細胞


圖 1 制備 Fe-PFH-PLGA/CS-DS 納米粒和靶向 SR-A 的示意圖納米粒靶向巨噬細胞表面的 SR-A 并被巨噬細胞內吞,隨后在 LIFU 照射下由于相變引起細胞損傷。Figure 1 Schematic diagram of the preparation of the Fe-PFH-PLGA/CS-DS NPs and the NPstargeting SR-A expressed on macrophage surfaces and endocytosed by macrophages, followedby cell damage due to phase transition under LIFU irradiation.

納米粒,比例尺,透射電鏡,圖像


圖 2 納米粒的表征e-PFH-PLGA,F(xiàn)e-PFH-PLGA/CS,F(xiàn)e-PFH-PLGA/CS-DS 和 Fe-PLGA/CS-DS 納米粒的透射電像(比例尺=100 nm)(a)。在功率密度為 1 W/cm2、2 W/cm2和 4 W/cm2的情況下,LIFU之前,3 分鐘和 8 分鐘后,F(xiàn)e-PFH-PLGA/CS-DS 納米粒的光學顯微鏡成像圖(比例尺=10m)(b)。Figure 2 Characterization of the NPs.TEM images of the Fe-PFH-PLGA, Fe-PFH-PLGA/CS, Fe-PFH-PLGA/CS-DS, and Fe-PLGA/CS-DS NPs (scale bar = 100 nm) (a). Optical microscopy images of the Fe-PFH-LGA/CS-DS NPs before and 3 min and 8 min after LIFU irradiation at power densities oW/cm2, 2 W/cm2, and 4 W/cm2(scale bar = 10 μm) (b).

傅立葉變換紅外光譜,圖像顯示,比例尺,綠色


圖 3 DS 連接的驗證,DS 和 Fe-PFH-PLGA/CS-DS 的傅立葉變換紅外光譜(a)。激光共聚焦圖像顯示 DiI 標記PLGA 殼(紅色)和 FITC 標記的 DS(綠色)(比例尺=2μm)(b)。Figure 3 Confirmation of DS coating.ourier transform infrared spectroscopy spectra of CS, DS, and Fe-PFH-PLGA/CS-DS N(a). The DiI and FITC-labelled Fe-PFH-PLGA/CS-DS NPs were visualized by thecolocalization of the DiI-labelled PLGA shell (red) and FITC-labelled DS (green) usingconfocal laser scanning microscopy (scale bar = 2 μm) (b).
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