發(fā)布時間：2014-07-27 10:39

　　一、目前檢測產(chǎn)品上微生物總數(shù)時，洗脫微生物的方法主要有以下幾種：
　　1.沖洗法：讓浸提液通過試驗部分的內(nèi)腔。可以靠重力或加泵來使液體流動。另外也可將洗脫液沖入產(chǎn)品中并夾住和抖動。
　　2.攪拌法：將試驗部分浸入裝有已知容積洗提液的適當(dāng)容積內(nèi)，在規(guī)定的一段時間內(nèi)攪拌或搓搖試驗部分。
　　3.擦拭法：準(zhǔn)備一個無菌的棉拭子占浸提液將產(chǎn)品里外擦拭一遍，將拭子放入準(zhǔn)備好的浸提液中作為檢驗液檢驗。
　　4.袋蠕動法：將試驗部分和一已知容量的洗提液裝在一個無菌胃型袋中，在袋中開動往復(fù)式攪動棒，使洗脫液貫串試驗部分內(nèi)外。該方法適用于軟質(zhì)、纖維類材料。
　　5.超聲法：將實驗部分浸入裝有已知容量洗提液的適當(dāng)容器中，在超生波清洗中處理容器及其內(nèi)裝物或?qū)⒊�聲波探頭浸入到容器內(nèi)洗脫液中進行處理。超聲波也能使微生物失去活性，尤其當(dāng)大能量傳輸時，使用探頭會比在超聲波清洗中更有可能使其失去活性。
　　6.振動法（機械或手工方式）：將實驗部分浸入裝有已知容量的洗提液的適當(dāng)容器中，并在機械振動（如往復(fù)式、軌道式或機械腕搖床）里進行振動。也可用手工振動，但其效力會因操作人員而異。
　　7.渦旋混合法：將實驗部分浸入裝有已知容積浸提液的密閉容器內(nèi)，該密閉容器放置在形成渦旋的漩渦混合器的旋轉(zhuǎn)托盤上。渦旋的形成取決于手動施加的壓力，渦旋中的變化會引起微生物去除的變化。
　　以上七種方法均有優(yōu)缺點，雖然方法很全面，但結(jié)合一次性使用血液管路和麻醉針的特點，本文介紹一種綜合提取的方法進行檢測，并對該方法進行了方法學(xué)的驗證。該方法有較好的洗脫效果，能基本反映這幾種產(chǎn)品的微生物負(fù)載情況。
　　二、具體方案如下所述
　　1.所用設(shè)備及要求
　　1.1環(huán)境要求
　　檢測此項目需在萬級凈化室，同時滿足在百級操作臺中進行。
　　1.2所用設(shè)備及器皿工具
　　高壓蒸汽滅菌機、干熱滅菌機、恒溫培養(yǎng)箱、移液管、培養(yǎng)皿、顯微鏡、試管、三角瓶、無菌袋、滅菌盒、接種環(huán)、酒精燈、剪刀、鑷子、無菌手套、無菌工作服、真空泵、濾膜、濾瓶。
　　1.3培養(yǎng)基、菌種、浸提液（PH=7.0氯化鈉蛋白胨緩沖液）
　　2.方法驗證和產(chǎn)品試驗的全過程
　　2.1計數(shù)培養(yǎng)基的適用性檢查
　　2.1.1 所用菌種
　　大腸埃希菌[CMCC（B）44102]
　　金黃色葡萄球菌[CMCC（B）26003]
　　枯草芽孢桿菌[CMCC（B）63501]
　　生孢梭菌[CMCC（B）64941]
　　白色念珠菌[CMCC（F）98001]
　　黑曲霉[CMCC（F）98003]
　　2.1.2. 菌液制備
　　2.1.2.1將大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌的新鮮培養(yǎng)物分別接種至營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，將生孢梭菌的新鮮培養(yǎng)物接種至硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基中，35 ℃培養(yǎng)24小時，分別用0.9%無菌氯化鈉溶液稀釋成每毫升含50-100cfu的菌液。
　　2.1.2.2將白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物接種至改良馬丁培養(yǎng)基上，24℃培養(yǎng)48小時，用0.9%無菌氯化鈉溶液稀釋成每毫升含50-100cfu的菌液。
　　2.1.2.3將黑曲霉菌的孢子接種至改良馬丁瓊脂斜面培養(yǎng)基上，24℃培養(yǎng)5天，加入5毫升含0.05%聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液，將孢子洗脫。然后用一支管口包有無菌棉花且能過濾菌絲的10毫升吸管吸出孢子懸液至無菌試管內(nèi)，用含0.05%聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液制成每毫升含孢子數(shù)50-100cfu的孢子懸液。
　　2.1.3 培養(yǎng)基適用性檢查
　　取大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌各50--100cfu，分別注入無菌平皿中，立即傾注營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，每株試驗菌平行制備2個平皿，筆耕論文，混勻，凝固，置30-35℃培養(yǎng)48h，計數(shù)；取生孢梭菌50--100cfu加入到25-30毫升硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基（含瓊脂，每15g培養(yǎng)基加入0.4g瓊脂）的試管中，振蕩混勻，平行制備兩支試管。置30--35℃厭氧條件下培養(yǎng)24h，計數(shù)。
　　取白色念珠菌、黑曲霉各50--100cfu，分別注入無菌平皿中，立即傾注玫瑰紅鈉培養(yǎng)基，每株試驗菌平行制備2個平皿混勻凝固置23-28℃培養(yǎng)72h計數(shù)。
　　取白色念珠菌50--100cfu注入無菌平皿中，立即傾注酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，平行制備2個平皿混勻凝固置23-28℃培養(yǎng)72h計數(shù)。同時用相應(yīng)的對照培養(yǎng)基替代被檢培養(yǎng)基進行上述試驗。
　　2.1.4 結(jié)果判定若被檢培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)不小于對照培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)的70%，且菌落形態(tài)大小與對照培養(yǎng)基上的一致，判該培養(yǎng)基的適用性檢查符合規(guī)定。

 

本文編號：7112