發(fā)布時(shí)間：2020-11-12 06:30

　　 異補(bǔ)骨脂查爾酮的農(nóng)藥學(xué)命名為苯丙烯菌酮,它是從豆科植物補(bǔ)骨脂種子中提取的抑菌活性成分,對蘋果腐爛病菌、水稻稻瘟病菌、黃瓜炭疽病菌、番茄炭疽病菌、禾谷鐮刀病菌等15種病原真菌均有較好的抑制活性。本實(shí)驗(yàn)首先以水稻稻瘟病菌為供試菌,采用紫外分光光度法和熒光分光光度法對細(xì)胞壁幾丁質(zhì)水解酶及其合成酶,葡聚糖水解酶及其合成酶進(jìn)行活性測定,并對兩種水解酶相應(yīng)的水解產(chǎn)物進(jìn)行含量測定,探究苯丙烯菌酮對水稻稻瘟病菌細(xì)胞壁的作用;測定了水稻稻瘟病菌細(xì)胞胞外磷物質(zhì)濃度,PI-DNA復(fù)合物熒光強(qiáng)度;采用氣質(zhì)聯(lián)用方法測定了甾醇類物質(zhì)含量,進(jìn)一步解釋殺菌劑對菌體細(xì)胞膜的影響;然后結(jié)合計(jì)算機(jī)分子模擬技術(shù),對幾丁質(zhì)酶進(jìn)行同源建模、活性位點(diǎn)預(yù)測、幾丁質(zhì)酶動(dòng)力學(xué)分析、幾丁質(zhì)酶與小分子復(fù)合物動(dòng)力學(xué)分析、分子對接和結(jié)合自由能計(jì)算等工作探究殺菌劑與幾丁質(zhì)酶的相互作用;最后通過SDS-PAGE蛋白凝膠電泳試驗(yàn)觀察苯丙烯菌酮對菌體內(nèi)蛋白生成及含量的影響。通過以上研究得出以下結(jié)論:苯丙烯菌酮可以調(diào)節(jié)細(xì)胞壁幾丁質(zhì)酶、葡聚糖酶及其合成酶的活性,并以氫鍵方式與幾丁質(zhì)酶的ASP267和ARG276殘基結(jié)合,與TYR270,PRO271,VAL272,LEU310,PRO311,TYR316和LEU317這些非極性的氨基酸殘基形成重要的疏水作用,破壞了細(xì)胞壁的結(jié)構(gòu)和功能;細(xì)胞膜相關(guān)實(shí)驗(yàn)表明苯丙烯菌酮處理組,菌體細(xì)胞膜的流動(dòng)性和完整性遭到破壞,加速了細(xì)胞凋亡進(jìn)程;蛋白電泳結(jié)果也顯示細(xì)胞內(nèi)蛋白的種類和數(shù)量發(fā)生了相應(yīng)的變化。通過以上研究為新型殺菌劑的開發(fā)提供思路。
【學(xué)位單位】：沈陽化工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：S435.111.41
【部分圖文】：

圖 1-1 黃酮類化合物的結(jié)構(gòu)柚子，酸橙）的果肉，果皮中含主要包括抗微生物，抗腫瘤，抗物，它對酵母菌之外的大部分微對金黃色葡萄球菌有一定的抑制率高于對照組，膜通透性隨著處用最好；同時(shí)在細(xì)菌蛋白質(zhì)和苷鋅和柚皮苷銅絡(luò)合物后細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞死亡，對細(xì)胞的破壞作用由柚皮苷及其金屬絡(luò)合物以細(xì)菌細(xì)物質(zhì)外泄，滲透率增大，膜通透

圖 1-1 黃酮類化合物的結(jié)構(gòu)1.3.2 黃酮類化合物殺菌機(jī)制柚皮苷在蕓香科植物（如柚子，酸橙）的果肉，果皮中含量較多，也是水果苦味的來源（圖 1-2）。柚皮苷的生物活性主要包括抗微生物，抗腫瘤，抗炎，抗氧化等功能。柚皮苷按結(jié)構(gòu)可以歸為雙氫類黃酮化合物，它對酵母菌之外的大部分微生物生長都有抑制作用。陳婧等認(rèn)為柚皮苷及其金屬絡(luò)合物對金黃色葡萄球菌有一定的抑制作用，在膜通透性實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)處理組細(xì)菌的電解質(zhì)相對滲透率高于對照組，膜通透性隨著處理時(shí)間的延長效果更為明顯，其中柚皮苷-Zn 對葡萄球菌的作用最好；同時(shí)在細(xì)菌蛋白質(zhì)和核酸泄露實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)：分別向菌體培養(yǎng)液中加入柚皮苷，柚皮苷鋅和柚皮苷銅絡(luò)合物后細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)和核酸不斷的泄露，大量的內(nèi)容物流出最終導(dǎo)致菌體細(xì)胞死亡，對細(xì)胞的破壞作用由強(qiáng)到弱依次是柚皮苷銅，柚皮苷鋅和柚皮苷[53]。由此可見，柚皮苷及其金屬絡(luò)合物以細(xì)菌細(xì)胞膜為靶點(diǎn)，通過破壞細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)使菌體內(nèi)蛋白質(zhì)和核酸類物質(zhì)外泄，滲透率增大，膜通透性增加，細(xì)胞最終變?yōu)榭諝せ蛘咦優(yōu)闅堅(jiān)�達(dá)到殺菌效果。

圖 1-3 查耳酮類化合物的結(jié)構(gòu)菌機(jī)制類化合物殺菌作用時(shí)選用四種化合物進(jìn)行bavachalcone，6-prenylapigenin 和 4-hydrox，2，3，4 對金黃色葡萄球菌最小抑制濃度下的抑菌作用和慶大霉素，諾氟沙星效果相μg/mL 和 16μg/mL�；�合物 4 的最小抑菌 為了進(jìn)一步探究化合物對金黃色葡萄球菌物 4 進(jìn)行研究，處理組化合物在最低抑制迅速減少，部分細(xì)胞膜發(fā)生溶解作用。使（35S）甲硫氨酸來評估化合物對細(xì)菌蛋白物 1，2，4 處理后細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)雖然有少量蛋抑制作用，其作用與諾氟沙星、利福平相當(dāng)
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本文編號：2880383