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中國不同地區(qū)舞毒蛾mtDNA序列分析及飼養(yǎng)技術優(yōu)化

發(fā)布時間:2020-11-16 06:16
   舞毒蛾Lymantria dispar(Linnaeus,1758),屬鱗翅目(Lepidoptera),裳蛾科(Erebidae),毒蛾亞科(Lymantriinae),毒蛾屬(Lymantria),是最重要的農(nóng)林害蟲之一。該物種分為歐洲型舞毒蛾(EGM)和亞洲型(AGM)舞毒蛾兩個亞型。其中,亞洲型舞毒蛾因其寄主種類更廣、雌性的飛行能力更強,長期以來被認為會對全球造成更大的威脅。鑒于此,為了更好地了解舞毒蛾特別是中國舞毒蛾種群的遺傳結構,本文采集多個國家不同地區(qū)舞毒蛾的線粒體DNA序列片段進行了深入的分析,并對舞毒蛾人工飼養(yǎng)技術進行了優(yōu)化。1.基于舞毒蛾線粒體COI基因的Barcoding研究結果:構建了分子系統(tǒng)發(fā)育樹,顯示中國舞毒蛾樣本分為三組:第一組(貴州息烽)與亞洲及歐洲舞毒蛾相分離而獨立形成一支。第二組包含大多數(shù)中國地理種群,聚合于世界舞毒蛾系統(tǒng)發(fā)育樹中第一簇亞洲舞毒蛾支系中。中國貴州遵義和四川成都的樣本形成了第三組,聚合于包含美國和歐洲種群的第二簇。其中,重復地區(qū)采樣的舞毒蛾地理種群聚類研究結果與前期(Chen et al.,2015)結果一致。以上研究結果揭示了中國舞毒蛾種群具有廣泛的遺傳變異特性。2.本文從全球38個種群中提取了 4個線粒體蛋白編碼基因(ND2、ND6、ATP6和ATP8),并利用貝葉斯法對舞毒蛾母系譜系進行了重建。結果顯示中國舞毒蛾種群分布于四個不同的集群:中國Ⅰ聚合于亞洲舞毒蛾的進化支中;中國Ⅱ則成為了亞洲進化支的姐妹群;中國Ⅲ、Ⅳ嵌套在西歐和北美舞毒蛾的進化支里。研究還證實伊朗的舞毒蛾基因型是獨立于三個亞種之外的新基因型。3.本文以亞洲型舞毒蛾和歐洲型舞毒蛾為供試蟲,研究了不同人工飼養(yǎng)方法對其生長發(fā)育指標的影響。結果表明,飼料經(jīng)Steam Kettle煮制后,能顯著減少幼蟲的感病率,其化蛹率和蛹重也顯著增加。此外,網(wǎng)紗處理初孵幼蟲這一措施,可增加初孵齡幼蟲的成活率,并降低感病率。鉆孔果凍杯飼養(yǎng)的幼蟲生長情況最好,其化蛹率和蛹重顯著高于方形培養(yǎng)皿及氣窗式果凍杯飼養(yǎng)的幼蟲。
【學位單位】:北京林業(yè)大學
【學位級別】:碩士
【學位年份】:2018
【中圖分類】:S763.42
【部分圖文】:

舞毒蛾,采樣分布


本研究共采集了?6個國家共22個地理種群的舞毒蛾樣本,相比之前的研究,著??重加大了中國舞毒蛾的采集量。在構建系統(tǒng)發(fā)育樹時,部分COI序列數(shù)據(jù)來自于前期??(Chen?etal.,2015)的研究。詳細樣本采集信息和序列數(shù)據(jù)見圖2-1,表2-1、2-2。??采集到的舞毒蛾卵塊經(jīng)過消毒處理后,在實驗室孵化并飼養(yǎng)至老熟幼蟲,將老熟幼蟲??饑餓處理24h后用無水乙醇殺死,后置于-80°C超低溫冰箱(VX380F,Thermo,USA)??凍存,以備DNA的提取。誘捕得到的成蟲烘干后置于三角紙中低溫保存,在需要提??取DNA時取出。國內(nèi)樣本的采集都經(jīng)森林保護總站批準,國外樣本來源于經(jīng)檢疫部??門許可的舞毒蛾引進項目,飼養(yǎng)實驗在動植物檢疫室內(nèi)完成。??12??

舞毒蛾,采樣分布


舞毒蛾樣本采集自40個地區(qū),其中中國有17個,日本6個,韓國3個,哈薩克??斯坦1個,吉爾吉斯斯坦1個,俄羅斯3個,伊朗1個,歐洲5個,美國3個。采集??地點及每個采集地的取樣數(shù)量見圖3-1、表3-1。部分樣本數(shù)據(jù)由美國農(nóng)業(yè)部APHIS??提供。對幼蟲進行饑餓處理24小時后,將幼蟲浸泡在無水乙醇中殺死并脫水備用。??舞毒蛾成蟲毒殺后烘干保存,后進行DNA提取。提取基因組DNA具體方法及其質(zhì)??量檢測操作見2.2.2?DNA提取方法。??|?????'?I??0?1,000?'?N??:^^丨::??::??AV?{.0?,-?ft'OT.?fcV?10(1*?0*0*F.?|(KV?O'?0*F?JlO*?0'0*K?115*?0?ft"F?〇?〇*?.?。浚遥?〇?〇????圖3-1線粒體DNA研宄中的舞毒蛾采樣分布圖??Fi

線粒體蛋白質(zhì),替換率,地理來源,外群


以LvwM/r/^r?wwArosa為外群的基于4個線粒體蛋白質(zhì)編碼基因的tfopa/*?分歧日期分析,并假設每個位點每年替換率為l.blO'樣本根據(jù)其地理來源以不色編碼。后驗概率顯示在分支上方。分支長度與分歧時間成正比(Mya)。??-2?MtDNA?genealogy?and?divergence?dates?of?Lymantria?dispar?derived?from?four?mitocho-coding?genes?and?assuming?substitution?rates?of?l.?I?x?10-8?per?site?per?year.?Lymantria?ulected?as?the?outgroup.?Samples?are?coded?in?different?colors?according?to?their?geographicior?probability?and?bootstrap?value?are?shown?above?the?branches.?Branch?lengths?are?propoto?divergence?times?in?millions?of?years?(Mya).??27??
【參考文獻】

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本文編號:2885722

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