發(fā)布時(shí)間：2020-12-25 23:22

　　我國作為農(nóng)業(yè)生產(chǎn)大國,每年需消耗大量的工業(yè)氮肥,工業(yè)氮肥的使用會(huì)造成農(nóng)產(chǎn)品品質(zhì)下降、土壤板結(jié)、水體富營養(yǎng)化、生產(chǎn)成本增加等一系列問題,而微生物復(fù)合肥料能解決這些問題,所以,選育高效率的微生物固氮菌株對(duì)發(fā)展可持續(xù)綠色農(nóng)業(yè)具有重要的意義。為了得到高效固氮菌,在吉首鉀長石礦區(qū)采集土壤樣品,采用純培養(yǎng)方法從中分離、篩選得到具有較強(qiáng)固氮能力的細(xì)菌28株。對(duì)28株細(xì)菌進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察,生理生化鑒定,以及采用分子生物學(xué)手段進(jìn)行16S r RNA序列分析,發(fā)現(xiàn)28株細(xì)菌別屬于8個(gè)科,10個(gè)屬,其中11株菌為根瘤菌屬,6株菌為芽胞桿菌屬,表明從鉀長石礦區(qū)土壤中分離獲得的固氮菌具有較好的多樣性,根瘤菌為優(yōu)勢種群。分別從每個(gè)屬中選取生長狀況較好的菌株作為代表菌株,通過發(fā)酵和凱氏定氮法測定,發(fā)現(xiàn)各屬代表菌株的固氮能力存在較大差異,根瘤菌和芽孢桿菌屬代表菌株的固氮能力最強(qiáng),其中根瘤菌代表菌株L13的96h發(fā)酵液氮含量達(dá)到10.71 mg/L,其次是芽孢桿菌代表菌株L10。為了能夠更好的了解和掌握菌株L13和L10的生長特性,對(duì)菌株L13和L10生長的溫度、p H、滲透壓、不同碳源等因子對(duì)固氮能力的影響進(jìn)行了比較。... 

【文章來源】：吉首大學(xué)湖南省

【文章頁數(shù)】：46 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

各固氮菌發(fā)酵液中氮含量

2.3.3 固氮細(xì)菌的 16S rRNA 基于片段的 PCR 擴(kuò)增瓊脂糖電泳結(jié)果用16S rRNA基因的特異性引物從細(xì)菌基因組DNA中成功的擴(kuò)增出大小約為1.6 kb的DNA片段，和預(yù)期的DNA片段大小一致。（如圖2.2）圖 2.2 細(xì)菌 16S rRNA 基因片段的 PCR 擴(kuò)增Fig.2.2 PCR amplification of 16S rRNA gene fragments from bacterial strains2.3.4 固氮細(xì)菌的系統(tǒng)發(fā)育分析對(duì)28株固氮細(xì)菌的16S rDNA進(jìn)行序列測定，將獲得的序列通過BLAST程序與GenBank數(shù)據(jù)庫中已報(bào)發(fā)道的16S rDNA序列進(jìn)行相似性比對(duì)分析。結(jié)果表明，28株固氮細(xì)菌分別屬于腸桿菌科、假單胞菌科、伯克菌科、葉桿菌科、布魯菌科、根瘤菌科、芽胞桿菌科和類芽胞桿菌科8個(gè)科。分屬伯克霍爾德屬、腸桿菌屬、劍菌屬、芽胞桿菌屬、葉桿菌屬、Mitsuaria、假單胞屬、類芽胞桿菌屬、檸檬酸桿菌屬等共10個(gè)屬，表明鉀長石礦區(qū)土壤中固氮菌種群具有多樣性。其中11株（39.28%）在系統(tǒng)發(fā)育上與根瘤菌屬（Rhizobium）關(guān)系密切，16S rDNA序列相似性高達(dá)98%~100%，為優(yōu)勢菌屬。其次6株為芽胞桿菌屬（Bacillus）。選取不同

3.3 結(jié)果與分析3.3.1 固氮細(xì)菌 L10 和 L13 的生長曲線兩株固氮能力最高的L10、L13細(xì)菌的生長曲線（如圖3.1）圖 3.1 菌株 L10、L13 的生長曲線Fig 3.1 Growht curve of strain L10 of L13由圖3.1可知，固氮菌株L10和L13的延滯期分別為0~12h和0~6h，對(duì)數(shù)生長期分別為12~72h和6~54h，穩(wěn)定期分別為72~96h和54~96h。對(duì)比L10和L13我們可以發(fā)現(xiàn)兩者的生長曲線存在差異，4個(gè)時(shí)期都不同，與L13相比，菌株L10的適應(yīng)期稍長，而其對(duì)數(shù)期也較長，但是平穩(wěn)期較短，較快的進(jìn)入了衰亡期。表明相同情況下

【參考文獻(xiàn)】：
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博士論文
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碩士論文
[1]水稻根際促生菌的分離鑒定及其對(duì)水稻作用效果的研究[D]. 胡雪.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2010
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