小金蝠蛾細胞免疫及其與冬蟲夏草菌的免疫互作初步研究
發(fā)布時間:2020-06-27 14:31
【摘要】:本研究旨在鑒定小金蝠蛾Thitarodes xiaojinensis血細胞類型,統(tǒng)計各類血細胞百分含量并檢測其細胞免疫能力。探究冬蟲夏草菌Ophiocordyceps sinensis是如何耐受小金蝠蛾細胞免疫的。利用光學相差顯微鏡觀察小金蝠蛾7齡幼蟲血細胞,并根據(jù)鱗翅目昆蟲血細胞特有形態(tài)對小金蝠蛾血細胞進行鑒定,利用96孔板對小金蝠蛾各類血細胞進行計數(shù)并計算各類血細胞的百分含量。利用釀酒酵母Saccharomyces cerevisiae以及Congo Red染色的DEAE-Sephadex A-25凝膠珠刺激小金蝠蛾,檢驗其細胞免疫反應(yīng)。利用掃描電子顯微鏡分別對感染7 d冬蟲夏草菌的小金蝠蛾血細胞(HTO)以及健康的小金蝠蛾血細胞(HT)進行觀察。對上述兩種處理的小金蝠蛾血細胞進行GFP標記的鬼筆環(huán)肽熒光染色,并利用激光共聚焦免疫熒光顯微鏡進行觀察。進一步利用Q-PCR對F-actins合成相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄水平進行檢測。小金蝠蛾7齡幼蟲血細胞由粒細胞、漿細胞、珠血細胞和類絳色細胞組成,百分含量分別為62.5%,26.6%,10.1%和0.8%,未發(fā)現(xiàn)典型的原血細胞。釀酒酵母刺激結(jié)果顯示,小金蝠蛾血細胞可以發(fā)生吞噬以及結(jié)節(jié)反應(yīng)。Congo Red染色的DEAE-Sephadex A-25凝膠珠刺激結(jié)果顯示,小金蝠蛾血細胞可以發(fā)生包囊反應(yīng)。通過掃描電子顯微鏡的觀察可以發(fā)現(xiàn),健康小金蝠蛾血細胞表面具有密集的絲狀偽足,而感染冬蟲夏草菌7 d的小金蝠蛾血細胞,其細胞表面絲狀偽足顯著減少。感染冬蟲夏草菌7 d的小金蝠蛾血細胞中微絲束不明顯,綠色熒光信號成彌散狀,與健康小金蝠蛾血細胞中較為清晰的微絲束有明顯差異。Q-PCR檢測結(jié)果顯示,感染冬蟲夏草菌7 d的小金蝠蛾血細胞DRF的表達量顯著降低;Thymosin的表達量顯著升高;Profilin的表達量顯著升高。小金蝠蛾血細胞組成及其形態(tài)與其他鱗翅目昆蟲一致,其中粒細胞的百分含量最高。小金蝠蛾血細胞對釀酒酵母刺激敏感,可發(fā)生吞噬和結(jié)節(jié)反應(yīng),對Congo Red染色的DEAE-Sephadex A-25凝膠珠刺激敏感,可發(fā)生包囊反應(yīng)。小金蝠蛾細胞免疫功能完善。冬蟲夏草菌可以通過對小金蝠蛾幼蟲血細胞絲狀偽足的形成產(chǎn)生不利影響,進而降低小金蝠蛾幼蟲細胞免疫能力。
【學位授予單位】:河北大學
【學位級別】:碩士
【學位授予年份】:2018
【分類號】:S567.35
【圖文】:
鱗翅目昆蟲血細胞類型[1]
10圖 1 小金蝠蛾幼蟲血細胞形態(tài)Fig. 1 Morphology of hemocytes of Thitarodes xiaojinensis larvae:小金蝠蛾血細胞孔板孵育初期,可見粒細胞(GR)、漿細胞(PL)、類絳色細細胞(Sph)。不同種類血細胞已用黑色箭頭標出,標尺= 40 μm。Initial incof hemocytes of T. xiaojinensis in well plates, granulocytes(GR), plasmatocytytoids(OE), and spherule cells(Sph) can be observed. Different types of hemocd out by black arrows, Scale bar = 40 μm. B:粒細胞 Granulocytes;C:atocytes; D:類絳色細胞 Oenocytoids; E:珠血細胞 Spherule cells. 標ale bar = 20 μm. 小金蝠蛾各類血細胞百分含量統(tǒng)計結(jié)果金蝠蛾 7 齡幼蟲各類血細胞在總血細胞中占比分別為粒細胞 62.5% ±5. 26.6% ±3.39%,珠血細胞為 10.1% ±2.56%,類絳色細胞為 0.8% ±0.7
本文編號:2731932
【學位授予單位】:河北大學
【學位級別】:碩士
【學位授予年份】:2018
【分類號】:S567.35
【圖文】:
鱗翅目昆蟲血細胞類型[1]
10圖 1 小金蝠蛾幼蟲血細胞形態(tài)Fig. 1 Morphology of hemocytes of Thitarodes xiaojinensis larvae:小金蝠蛾血細胞孔板孵育初期,可見粒細胞(GR)、漿細胞(PL)、類絳色細細胞(Sph)。不同種類血細胞已用黑色箭頭標出,標尺= 40 μm。Initial incof hemocytes of T. xiaojinensis in well plates, granulocytes(GR), plasmatocytytoids(OE), and spherule cells(Sph) can be observed. Different types of hemocd out by black arrows, Scale bar = 40 μm. B:粒細胞 Granulocytes;C:atocytes; D:類絳色細胞 Oenocytoids; E:珠血細胞 Spherule cells. 標ale bar = 20 μm. 小金蝠蛾各類血細胞百分含量統(tǒng)計結(jié)果金蝠蛾 7 齡幼蟲各類血細胞在總血細胞中占比分別為粒細胞 62.5% ±5. 26.6% ±3.39%,珠血細胞為 10.1% ±2.56%,類絳色細胞為 0.8% ±0.7
【參考文獻】
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1 張德利;涂永勤;;小金蝠蛾的生態(tài)型研究[J];環(huán)境昆蟲學報;2015年05期
2 張姝;張永杰;SHRESTHA Bhushan;徐建平;王成樹;劉杏忠;;冬蟲夏草菌和蛹蟲草菌的研究現(xiàn)狀、問題及展望[J];菌物學報;2013年04期
3 涂永勤;張德利;曾緯;陳仕江;;四川小金蝠蛾生物學特性研究[J];應(yīng)用昆蟲學報;2011年04期
4 劉飛;伍曉麗;尹定華;陳仕江;曾緯;;冬蟲夏草寄主昆蟲的生物學研究概況[J];重慶中草藥研究;2005年01期
本文編號:2731932
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