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大田條件下轉基因紫花苜蓿(Medicago sativa)的生長性狀及飼用品質評價

發(fā)布時間:2020-10-31 22:18
   干旱、鹽堿和高溫等非生物脅迫已對全球農作物種植及生態(tài)環(huán)境造成了嚴重危害。紫花苜蓿(Medicago sativa)是一種飼用品質優(yōu)良的豆科牧草,具有營養(yǎng)價值高、適口性好等特點,被譽為“牧草之王”。然而,由于自身抗逆性有限,紫花苜蓿不適宜在我國環(huán)境惡劣的西北地區(qū)大規(guī)模栽培,這成為了阻礙其推廣種植的重要限制因素。霸王(Zygophyllum xanthoxylum)是生長在荒漠地區(qū)的多漿旱生植物,在漫長的進化過程中形成了獨特的抗逆機制,含有豐富的抗逆基因。實驗室前期將霸王中參與Na~+積累以用于細胞滲透調節(jié)的液泡膜Na~+/H~+逆向轉運蛋白(NHX1)和H~+-焦磷酸酶(VP)基因聚合轉入紫花苜蓿,獲得的T_1代ZxNHX1-ZxVP1-1轉基因紫花苜蓿株系具有更強的耐鹽與抗旱性。此外,又將霸王角質層合成的相關基因ZxABCG11分別融合蒺藜苜蓿(Medicago truncatula)和擬南芥(Arabidopsis thaliana)的表皮特異性啟動子MtML1和AtCER6后導入紫花苜蓿,顯著提高了轉基因株系的抗旱性和耐熱性。然而,目前對這些轉基因材料在大田環(huán)境下的生長性狀以及飼用品質等方面的表現還不清楚。因此,在前期研究基礎上,本論文對上述轉基因紫花苜蓿在大田條件下的生長狀況進行系統(tǒng)分析,并評價其飼用品質,以期為進一步培育高產、抗逆、優(yōu)質的紫花苜蓿新品種奠定基礎。主要結果如下:(1)大田條件下,ZxNHX1-ZxVP1-1轉基因紫花苜蓿的葉片大小、干草產量及地上部干重和鮮重分別比野生型高出56.4%、74.5%、31.7%和45.1%,莖粗也高于野生型;另外,其初花期凈光合速率與水分利用效率分別比野生型高出19.3%和45.1%,表明ZxNHX1-ZxVP1-1轉基因紫花苜蓿具有更優(yōu)良的生長性狀。(2)大田條件下,AtCER6-ZxABCG11和MtML1-ZxABCG11轉基因紫花苜蓿的葉片大小顯著大于野生型,分別增加了49.8%和54.1%;與野生型相比,兩個株系的株高均顯著降低,且地上部干鮮重及干草產量均沒有顯著差異。有趣的是,AtCER6-ZxABCG11轉基因紫花苜蓿的分枝數多于野生型,而MtML1-ZxABCG11轉基因紫花苜蓿的莖粗高于野生型。光合性能方面,AtCER6-ZxABCG11和MtML1-ZxABCG11轉基因紫花苜蓿初花期凈光合速率和水分利用效率均顯著高于野生型。以上結果表明AtCER6-ZxABCG11和MtML1-ZxABCG11轉基因紫花苜蓿的干草產量與野生型無顯著差異,但其光合性能卻優(yōu)于野生型。(3)三種轉基因紫花苜蓿的花期均異于野生型。ZxNHX1-ZxVP1-1轉基因紫花苜蓿與野生型同時開花,但花期較野生型長19 d;AtCER6-ZxABCG11和MtML1-ZxABCG11轉基因紫花苜蓿較野生型遲開花17 d,花期長于野生型38 d。(4)大田條件下,T_1代ZxNHX1-ZxVP1-1轉基因紫花苜蓿的粗蛋白、粗脂肪含量顯著高于野生型,酸性洗滌纖維、中性洗滌纖維和木質素含量顯著低于野生型,相對飼用價值較野生型高出35.4%,表明ZxNHX1-ZxVP1-1轉基因紫花苜蓿與野生型相比具有更好的飼用品質,適宜作為優(yōu)良牧草進行推廣應用。(5)大田條件下,AtCER6-ZxABCG11轉基因紫花苜蓿的粗蛋白、粗灰分含量顯著低于野生型;粗脂肪、中性洗滌纖維、酸性洗滌纖維、木質素和相對飼用價值與野生型相比無明顯差異。而MtML1-ZxABCG11轉基因紫花苜蓿中的粗脂肪顯著低于野生型,粗蛋白、粗灰分和酸性洗滌纖維與野生型相比無明顯差異;中性洗滌纖維及木質素顯著高于野生型,相對飼用價值比野生型低12.9%。以上結果表明ZxABCG11的超表達并未提升轉基因紫花苜蓿的飼用品質,但由于其具有較強抗逆性而具備開發(fā)為生態(tài)治理草種的潛力。
【學位單位】:蘭州大學
【學位級別】:碩士
【學位年份】:2019
【中圖分類】:S541.9
【部分圖文】:

示意圖,小區(qū),示意圖,大田


學碩士學位論文 大田條件下轉基因紫花苜蓿(Medicago sativa)的生長性狀及飼用品質評價2018 年 5 月 5 日將扦插苗移栽至大田,實驗區(qū)總面積為 725 m2,各小區(qū) 15 m2(3 m×5 m),株行距均為 20 cm,各株系采用隨機區(qū)組設計,每個復 6 次。采用噴灌方式進行灌溉,每個小區(qū)安裝 2 個自動噴頭,噴灑半徑 2插苗移栽后,澆透水,以后視天氣情況對大田噴灌,每次噴灑 3 h,保證一致(圖 3-1)。

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19圖 3-2 大田移栽后不同時期各轉基因紫花苜蓿株系和野生型的生長狀況。(A):7 月 2日;(B):7 月 16 日;(C): 8 月 3 日。WT:野生型;NV:ZxNHX1-ZxVP1-1 轉基因紫花苜蓿;AA:AtCER6-ZxABCG11 轉基因紫花苜蓿;MA:MtML1-ZxABCG11 轉基因紫花苜蓿。Figure 3-2 Growth performance of transgenic alfalfa lines and wild type at different dates afterfield transplantation. (A): July 2nd; (B): July 16th; (C): August 3rd. WT: wild; NV: ZxNHX1-ZxVP1-1 transgenic alfalfa;AA: AtCER6-ZxABCG11 transgenic alfalfa; MA: MtML1-ZxABCG11transgenic alfalfa.

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圖 3-3 大田移栽后不同日期各轉基因紫花苜蓿株系和野生型的株高(A)、莖粗(B)和分枝數(C)。WT:野生型;NV:ZxNHX1-ZxVP1-1 轉基因紫花苜蓿;AA:AtCER6-ZxABCG11 轉基因紫花苜蓿;MA:MtML1-ZxABCG11 轉基因紫花苜蓿。Figure 3-3 Plant height (A), stem thickness (B) and branching number (C) of WT and transgenicplants measured at different dates after field transplantation. WT: wild; NV: ZxNHX1-ZxVP1-1transgenic alfalfa;AA: AtCER6-ZxABCG11 transgenic alfalfa; MA: MtML1-ZxABCG11 transgenicalfalfa.
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