發(fā)布時間：2020-11-08 19:38

　　 皺紋盤鮑(Haliotis discus hannai Ino)隸屬于腹足綱,是我國重要的養(yǎng)殖經(jīng)濟(jì)貝類。然而,近年來由于鮑養(yǎng)殖業(yè)的飛速發(fā)展而出現(xiàn)的自繁自育、種質(zhì)退化以及養(yǎng)殖環(huán)境惡化致使的病害頻發(fā)等問題,嚴(yán)重影響了皺紋盤鮑產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展。因此,深入研究皺紋盤鮑的種質(zhì)資源,培育生長快速、抗病性良好的皺紋盤鮑優(yōu)良品種是確保其養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)可持續(xù)發(fā)展的重要手段。本研究以四個不同養(yǎng)殖群體的皺紋盤鮑個體為研究對象,研究內(nèi)容分為三個部分,第一部分基于ITS1、16S、COI和微衛(wèi)星標(biāo)記對四個不同養(yǎng)殖群體的皺紋盤鮑親鮑進(jìn)行遺傳距離估算;第二部分采用4×4完全雙列雜交法,構(gòu)建16個自交與雜交F_1全同胞家系,結(jié)合微衛(wèi)星親權(quán)鑒定技術(shù),對采集的樣品進(jìn)行親子鑒定,比較各家系的生長與存活狀況;第三部分繼續(xù)分析13個F_2代全同胞家系的生長與存活,探索在傳代過程中,較好的生長和存活性狀是否可以穩(wěn)定地遺傳給后代,為進(jìn)一步的家系選育工作提供參考依據(jù)。主要研究結(jié)果如下:1.四個養(yǎng)殖群體皺紋盤鮑的遺傳距離估算基于ITS1、16S、COI基因序列片段及微衛(wèi)星標(biāo)記,分析皺紋盤鮑四個不同養(yǎng)殖群體8個親本間的遺傳距離并構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹。結(jié)果表明,基于不同分子標(biāo)記構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹間存在差異,以基于序列數(shù)據(jù)和微衛(wèi)星數(shù)據(jù)構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹之間差別較大;基于ITS+16S+COI數(shù)據(jù)集構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹各分支節(jié)點(diǎn)自展值較高,結(jié)果較為理想可信;皺紋盤鮑親本間遺傳距離和地理距離之間不存在嚴(yán)格的相關(guān)關(guān)系,說明各養(yǎng)殖群體間可能存在一定的基因交流。上述研究結(jié)果為利用這四個養(yǎng)殖群體進(jìn)行皺紋盤鮑家系選育提供了參考。2.四個養(yǎng)殖群體自交和雜交家系F_1代的生長與存活比較選用8個多態(tài)性高的微衛(wèi)星位點(diǎn)(Afa029,Chd092,ddh41,CH1820,CHd205,Afa017,Afa005,ddh52)對皺紋盤鮑四個養(yǎng)殖群體自交和雜交家系F_1代個體進(jìn)行基因分型,排除污染個體,將絕大部分F_1代個體分配至單一家系。用于親子鑒定的8個位點(diǎn)均呈現(xiàn)出多態(tài)性,共檢測到92個等位基因;8個位點(diǎn)的觀測雜合度在0.4762~0.8000之間,期望雜合度在0.6800~0.9111之間,PIC值在0.6460~0.8930之間。根據(jù)親子鑒定結(jié)果,結(jié)合F_1代皺紋盤鮑不同生長時期的體征數(shù)據(jù),分析各家系的生長和存活,結(jié)果表明,HDRC、HDDL與DLHD家系在各生長參數(shù)與生長速度上有明顯的雜種優(yōu)勢,HDDL、RCDL、DLHD家系在存活上表現(xiàn)明顯的雜種優(yōu)勢,可對其進(jìn)行進(jìn)一步的家系選育。3.四個養(yǎng)殖群體自交和雜交家系F_2代的生長與存活比較從皺紋盤鮑F_1代生長和存活表現(xiàn)較優(yōu)的家系中,挑選性腺發(fā)育良好,體征性狀較優(yōu)的個體作為親本,成功構(gòu)建♀13×♂7的13個全同胞家系。結(jié)合親子鑒定技術(shù),分析F_2代不同家系的生長和存活,結(jié)果表明,HDDL家系產(chǎn)生的F_2代表現(xiàn)較好的生長和存活,說明在傳代過程中,優(yōu)良的生長和存活性狀可以穩(wěn)定地遺傳給子代,但不表現(xiàn)為穩(wěn)定的遺傳;♀HD和♂DL的親本組合產(chǎn)生的F_1代和F_2代均表現(xiàn)優(yōu)良的生長和存活性狀,可用于皺紋盤鮑養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)中生產(chǎn)穩(wěn)定、優(yōu)質(zhì)的苗種。
【學(xué)位單位】：上海海洋大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2017
【中圖分類】：S917.4
【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
引言
    1. 皺紋盤鮑概況
        1.1 皺紋盤鮑生物學(xué)特征
        1.2 皺紋盤鮑養(yǎng)殖現(xiàn)狀
    2. 皺紋盤鮑遺傳育種研究進(jìn)展
        2.1 選擇育種
        2.2 雜交育種
        2.3 多倍體育種
        2.4 分子標(biāo)記輔助育種
    3. 幾種常見的DNA分子標(biāo)記技術(shù)及其在鮑的研究進(jìn)展
        3.1 限制性片段長度多態(tài)性
        3.2 簡單序列重復(fù)標(biāo)記
        3.3 隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA
        3.4 線粒體DNA
        3.5 可變數(shù)目串聯(lián)重復(fù)序列
        3.6 擴(kuò)增片段長度多態(tài)性
        3.7 表達(dá)序列標(biāo)簽
    4. 貝類雜交及雜種優(yōu)勢的研究進(jìn)展
    5. 本研究的目的和意義
第一章、四個養(yǎng)殖群體皺紋盤鮑的遺傳距離估算
    1. 材料與方法
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.2 實(shí)驗(yàn)方法
            1.2.1 實(shí)驗(yàn)儀器與設(shè)備
            1.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑及耗材
            1.2.3 樣品DNA提取及濃度測定
        1.3 PCR擴(kuò)增
            1.3.1 引物信息
            1.3.2 PCR擴(kuò)增體系及程序
        1.4 PCR產(chǎn)物檢測
        1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析
    2 結(jié)果
        2.1 PCR產(chǎn)物檢測結(jié)果
        2.2 基于ITS的遺傳距離估算和系統(tǒng)發(fā)育樹構(gòu)建
        2.3 基于 16S、COI的遺傳距離估算和系統(tǒng)發(fā)育樹構(gòu)建
        2.4 基于ITS+16S+COI的遺傳距離和系統(tǒng)發(fā)育樹構(gòu)建
        2.5 基于微衛(wèi)星的遺傳距離估算和系統(tǒng)發(fā)育樹構(gòu)建
    3 討論
        3.1 基于不同分子標(biāo)記的建樹效果評估
        3.2 地理距離和遺傳距離的比較
1代的生長與存活比較'>第二章、四個養(yǎng)殖群體自交和雜交家系F₁代的生長與存活比較
1代構(gòu)建與微衛(wèi)星親權(quán)鑒定'>    第一節(jié) 四個養(yǎng)殖群體自交與雜交家系F₁代構(gòu)建與微衛(wèi)星親權(quán)鑒定
        1 材料與方法
            1.1 實(shí)驗(yàn)材料
            1.2 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
            1.3 苗種培育
                1.3.1 人工授精與孵化
                1.3.2 幼蟲培育
                1.3.3 稚鮑養(yǎng)成
            1.4 取樣及數(shù)據(jù)測量
            1.5 實(shí)驗(yàn)方法
                1.5.1 實(shí)驗(yàn)儀器與設(shè)備
                1.5.2 實(shí)驗(yàn)試劑及耗材
                1.5.3 樣品DNA提取及濃度測定
            1.6 微衛(wèi)星擴(kuò)增與產(chǎn)物檢測
            1.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析
        2 結(jié)果
            2.1 毛細(xì)管電泳檢測結(jié)果
            2.2 污染個體的鑒定和鑒定成功率
            2.3 微衛(wèi)星位點(diǎn)擴(kuò)增結(jié)果分析
            2.4 親權(quán)鑒定
        3 討論
            3.1 微衛(wèi)星在家系鑒定中的應(yīng)用
            3.2 親子鑒定效果評價
            3.3 微衛(wèi)星熒光標(biāo)記STR分型法的優(yōu)缺點(diǎn)
1自交與雜交家系子代的生長和存活比較'>    第二節(jié) F₁自交與雜交家系子代的生長和存活比較
        1 材料與方法
            1.1 實(shí)驗(yàn)材料
            1.2 取樣及數(shù)據(jù)測量
            1.3 數(shù)據(jù)分析
        2 結(jié)果
1代親子鑒定結(jié)果'>            2.1 F₁代親子鑒定結(jié)果
1各家系不同時期生長的比較'>            2.2 F₁各家系不同時期生長的比較
1代各家系生長參數(shù)的比較'>                2.2.1 F₁代各家系生長參數(shù)的比較
1代各家系生長速度的比較'>                2.2.2 F₁代各家系生長速度的比較
1代各雜交家系不同時期生長雜種優(yōu)勢的比較'>            2.3 F₁代各雜交家系不同時期生長雜種優(yōu)勢的比較
1代各家系存活率與雜種優(yōu)勢的比較'>            2.4 F₁代各家系存活率與雜種優(yōu)勢的比較
        3 討論
2代的生長與存活比較'>第三章、四個養(yǎng)殖群體自交和雜交家系F₂代的生長與存活比較
2代構(gòu)建'>    第一節(jié) 四個養(yǎng)殖群體自交與雜交家系F₂代構(gòu)建
        1 材料與方法
            1.1 實(shí)驗(yàn)材料
            1.2 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
            1.4 數(shù)據(jù)分析
        2 結(jié)果
        3 討論
2代親權(quán)鑒定與生長存活性狀比較'>    第二節(jié) 自交與雜交家系F₂代親權(quán)鑒定與生長存活性狀比較
        1 材料與方法
            1.1 實(shí)驗(yàn)材料
            1.2 取樣及數(shù)據(jù)測量
            1.3 實(shí)驗(yàn)方法
                1.3.1 實(shí)驗(yàn)儀器與設(shè)備
                1.3.2 實(shí)驗(yàn)試劑及耗材
            1.4 樣品DNA提取及濃度測定
            1.5 微衛(wèi)星擴(kuò)增與產(chǎn)物檢測
            1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析
        2 結(jié)果
            2.1 親子鑒定
2代各家系生長參數(shù)的比較'>            2.2 F₂代各家系生長參數(shù)的比較
            2.3 各家系存活能力的比較
1代和F₂代家系生長和存活的比較'>            2.4 F₁代和F₂代家系生長和存活的比較
        3 討論
小結(jié)
參考文獻(xiàn)
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致謝

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本文編號：2875243