發(fā)布時間：2024-05-17 17:24

　　為了研究DMRT基因家族中Dmrta2-2 (Doble-sex and mab-3 relatated transcription factor a2-2)基因在淡水蚌的性腺發(fā)育和性別分化等過程在發(fā)揮的作用,本研究從本實驗室已有的三角帆蚌(Hyriopsis cumingii)cDNA庫中篩選出Dmrta2-2 (HcDmrta2-2)短片段,利用RACE技術(shù)擴(kuò)增和鑒定出了Hc Dmrta2-2基因。獲得核苷酸序列全長為1 682 bp (登錄號:MK372348),ORF (Open reading frame)區(qū)為1 170 bp,編碼389個氨基酸。NCBI在線預(yù)測該基因保守位點(diǎn),發(fā)現(xiàn)存在一個超保守的DM和DMA區(qū)域,氨基酸序列比對及系統(tǒng)發(fā)育樹表明三角帆蚌與池碟蚌(Hyriopsis schlegelii)親緣關(guān)系高達(dá)90%,在進(jìn)化樹中聚為一小支。通過實時熒光定量(qRT-PCR)和原位雜交檢測Hc Dmrta2-2基因在各組織和發(fā)育時期的表達(dá)水平,發(fā)現(xiàn)該基因在成熟蚌的鰓、肝、腎、外套膜、閉殼肌、斧足及性腺中均表達(dá),除了肝,其它各組織中雌雄表達(dá)差異均顯著(p<0.05),...

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圖1三角帆蚌Dmrta2-2基因cDNA完整序列及編碼的氨基酸序列

從GenBank數(shù)據(jù)庫中下載了7個代表性物種的Dmrta2氨基酸序列，同三角帆蚌(H.cumingii)HcD-mrta2-2進(jìn)行比對，發(fā)現(xiàn)三角帆蚌(H.cumingii)與池蝶蚌(Hyriopsisschlegelii)相似度最高，達(dá)到90%，與蝦夷扇貝(Mizuhop....

圖2三角帆蚌與其他各物種Dmrta2蛋白序列比對分析

將上述以及的物種的物種Dmrta2蛋白序列用MEGA7.0構(gòu)造NJ(Neighbor-joining)發(fā)育樹，可明顯看出三角帆蚌(H.cumingii)與池碟蚌(H.schlegelii)進(jìn)化地位最近，聚為一小支，其次與太平洋牡蠣(Crassostreagigas)和蝦夷扇....

圖3三角帆蚌與其它物種Dmrta2氨基酸序列的系統(tǒng)發(fā)育樹

胚胎期第0天、第3天、第6天、第9天和幼齡第1月～第8月性腺的表達(dá)結(jié)果顯示，HcDmrta2-2基因在胚胎期第3天表達(dá)量達(dá)到峰值，接著迅速下降后維持在較穩(wěn)定狀態(tài)。幼齡階段1～3月表達(dá)逐漸增加，3月齡后開始下降，并在4～8月維持在一個相對穩(wěn)定狀態(tài)(圖5)。1.5HcDmrta....

圖4HcDmrta2-2在雌雄各組織的分布檢測

2齡三角帆蚌性腺原位雜交結(jié)果顯示，HcDmrta2-2在精巢和卵巢中均有檢測到表達(dá)信號。在卵巢中表達(dá)信號主要存在卵母細(xì)胞的細(xì)胞膜上，在精巢中信號較弱，主要存在于濾泡壁(圖7)。2討論

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