發(fā)布時間：2024-05-29 06:22

　　TGF-p超家族成員在脊椎動物的生殖、發(fā)育、和生長等方面均具有重要作用。gsdf (gonadal somaderived factor)是TGF-p超家族新成員,以往的研究表明gsdf僅存在于硬骨魚類和腔棘魚類,且主要表達于性腺。Gsdf功能研究以往多是通過分析其在性腺的表達模式來推測它對于性別決定與分化的作用,鮮有研究通過缺失功能(loss of function)和獲得功能(gain of function)兩方面研究Gsdf對性別決定與分化的影響。尼羅羅非魚(Oreochromis niloticus)是重要的世界性養(yǎng)殖魚類,具有XX/XY性別決定類型。因易于獲得單性魚苗以及全基因組測序的公開,羅非魚已成為研究魚類性別決定與分化的良好實驗模型。本研究從基因組水平和性腺轉錄組水平對羅非魚gsdf進行分離鑒定,并做進一步的生物信息學分析；通過RT-PCR、real-time PCR和免疫組化等方法分析gsdf/Gsdf在羅非魚中的表達模式；使用轉基因過表達和CR1SPR/Cas9介導的基因敲除兩種方法,從正反兩方面對Gsdf進行功能研究,以揭示Gsdf在羅非魚性別決定與分化中的作用...

【文章頁數(shù)】：81 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
英文縮略詞
摘要
Abstract
第一章 文獻綜述
    1 脊椎動物的性別決定
        1.1 哺乳類性別決定
        1.2 鳥類性別決定
        1.3 爬行類性別決定
        1.4 兩棲類性別決定
        1.5 魚類性別決定
    2 性別決定基因的研究進展
        2.1 SRY/Sry
        2.2 Dmrt1
        2.3 Foxl2
        2.4 DMY
        2.5 DM-W
        2.6 amhY
        2.7 amhr Ⅱ
        2.8 sdY
        2.9 gsdyY

    3 硬骨魚類gsdf研究現(xiàn)狀
    4 科學問題的提出和本研究的目的意義
第二章 羅非魚gsdf/Gsdf分離及表達的初步研究
    1 前言
    2 材料、儀器與方法
        2.1 實驗動物
        2.2 實驗試劑和儀器
        2.3 有關試劑的配制
        2.4 實驗方法
            2.4.1 羅非魚gsdf基因的分離
            2.4.2 gsdf基因結構分析
            2.4.3 gsdf氨基酸序列比對
            2.4.4 gsdf系統(tǒng)進化分析
            2.4.5 gsdf共線性分析
            2.4.6 總RNA提取
            2.4.7 第一鏈cDNA的合成
            2.4.8 羅非魚gsdf組織表達模式分析
            2.4.9 羅非魚性腺個體發(fā)育過程中gsdf的表達
            2.4.10 免疫組化檢測羅非魚性腺組織中Gsdf表達
    3 結果與分析
        3.1 gsdf基因結構分析
        3.2 gsdf氨基酸同源性比對
        3.3 gsdf系統(tǒng)進化分析
        3.4 gsdf共線性分析
        3.5 gsdf組織表達模式分析
        3.6 gsdf在不同時期性腺中的表達
        3.7 Gsdf在羅非魚性腺發(fā)育過程中的細胞定位
    4 討論
第三章 羅非魚Gsdf功能的初步研究
    1 前言
    2 材料、儀器與方法
        2.1 實驗動物
        2.2 實驗試劑和儀器
        2.3 有關試劑的配制
        2.4 實驗方法
            2.4.1 羅非魚gsdf CRISPR/Cas9敲除
            2.4.2 羅非魚性腺過表達gsdf
            2.4.3 gsdf突變F1代的建立
    3 結果與分析
        3.1 敲除序列的選擇以及突變檢測
        3.2 陽性敲除魚的篩選和敲除效率統(tǒng)計
        3.3 Gsdf缺失產(chǎn)生不完全性逆轉
        3.4 3月齡XY個體Gsdf缺失陽性魚性腺免疫組化檢測結果
        3.5 6月齡XY個體Gsdf敲除陽性魚性腺免疫組化檢測結果
        3.6 Gsdf缺失陽性魚血清雌激素水平上調雄激素水平下調
        3.7 轉基因過表達Gsdf的篩選和效率統(tǒng)計
        3.8 轉基因過表達Gsdf陽性個體發(fā)生性逆轉
        3.9 gsdf突變F1代魚檢測
    4 討論
結論
參考文獻
致謝
在讀期間所發(fā)表的論文
在讀期間參加科研情況



本文編號：3984191

suoshi