發(fā)布時(shí)間：2024-06-01 10:32

　　目前,魚(yú)類育種領(lǐng)域的一個(gè)重要方向是基因功能和轉(zhuǎn)基因研究。通過(guò)發(fā)掘重要性狀主效基因或其基因型,開(kāi)展基因與性狀關(guān)聯(lián)分析或轉(zhuǎn)基因研究,從而選育出性狀優(yōu)良的新品種,有利于魚(yú)類的養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)不斷進(jìn)步與發(fā)展。為探索草魚(yú)抗出血病新技術(shù),本研究采用衣殼蛋白靶向滅活(Capsid-targeted viral inactivation,CTVI)策略,利用Tgf2轉(zhuǎn)座子元件,構(gòu)建了帶爪蟾EF1α和鯉熱休克蛋白70的2種不同啟動(dòng)子的CTVI轉(zhuǎn)基因質(zhì)粒p Tgf2-EF1α-VP3-SN和p Tgf2-Hsp70-VP3-SN。該2種質(zhì)粒均含有草魚(yú)GCRV病毒衣殼蛋白VP3與金黃色葡萄球菌核酸酶(Staphylococcus nuclease,SN)融合表達(dá)閱讀框。通過(guò)將2種CTVI轉(zhuǎn)基因質(zhì)粒與體外合成的Tgf2轉(zhuǎn)座酶5’加帽m RNA共同顯微注射入草魚(yú)1-2細(xì)胞期受精卵,獲得了帶2種不同啟動(dòng)子的CTVI轉(zhuǎn)基因草魚(yú)群體。PCR和測(cè)序結(jié)果顯示,2種轉(zhuǎn)基因陽(yáng)性草魚(yú)基因組中均含有外源GCRV病毒衣殼蛋白VP3與金黃色葡萄球菌核酸酶SN基因片段,陽(yáng)性率分別為40.2%和37.0%,表明Tgf2轉(zhuǎn)座子已成功介導(dǎo)CTVI融...

【文章頁(yè)數(shù)】：74 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
引言
第一章 草魚(yú)呼腸孤病毒衣殼蛋白靶向滅活轉(zhuǎn)基因P0代的構(gòu)建
    1.1 材料和方法
        1.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1.2 轉(zhuǎn)基因質(zhì)粒p Tgf2- EF1α-VP3-SN的構(gòu)建
        1.1.3 轉(zhuǎn)基因質(zhì)粒p Tgf2-Hsp70P-VP3-SN的構(gòu)建
        1.1.4 Tgf2轉(zhuǎn)座酶m RNA的體外轉(zhuǎn)錄
        1.1.5 顯微注射
        1.1.6 轉(zhuǎn)基因陽(yáng)性個(gè)體的檢測(cè)與篩選
    1.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
        1.2.1 轉(zhuǎn)基因質(zhì)粒p Tgf2-EF1α-VP3-SN和p Tgf2-Hsp70-VP3-SN的構(gòu)建
        1.2.2 轉(zhuǎn)基因草魚(yú)陽(yáng)性個(gè)體的觀察與檢測(cè)
        1.2.3 轉(zhuǎn)基因p Tgf2- EF1α-VP3-SN質(zhì)粒草魚(yú)陽(yáng)性個(gè)體檢測(cè)
        1.2.4 轉(zhuǎn)基因p Tgf2-Hsp70-VP3-SN質(zhì)粒草魚(yú)陽(yáng)性個(gè)體檢測(cè)
    1.3 討論
        1.3.1 選用EF1α 和Hsp70啟動(dòng)子構(gòu)建轉(zhuǎn)基因載體的原因
        1.3.2 Tgf2轉(zhuǎn)座系統(tǒng)可提高草魚(yú)CTVI轉(zhuǎn)基因的效率
        1.3.3 抗草魚(yú)出血病轉(zhuǎn)基因P0代構(gòu)建的潛在價(jià)值
第二章 團(tuán)頭魴C(jī)hordin基因c DNA全序列的克隆及功能研究
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料、儀器和試劑
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)用魚(yú)和胚胎
        2.1.2 主要儀器
        2.1.3 主要生物化學(xué)試劑
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 團(tuán)頭魴胚胎及成魚(yú)組織總RNA的提取
        2.2.2 團(tuán)頭魴C(jī)hordin基因c DNA全長(zhǎng)克隆
        2.2.3 逆轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)和實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析
        2.2.4 整胚原位雜交
        2.2.5 饑餓與生長(zhǎng)激素處理
        2.2.6 序列比對(duì)及進(jìn)化樹(shù)構(gòu)建
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
        2.3.1 團(tuán)頭魴C(jī)hordin基因c DNA全長(zhǎng)克隆與分析
        2.3.2 團(tuán)頭魴C(jī)hordin基因氨基酸序列同源性及分子進(jìn)化分析
        2.3.3 團(tuán)頭魴C(jī)hordin基因的m RNA表達(dá)分析
        2.3.4 饑餓和生長(zhǎng)激素處理結(jié)果分析
    2.4 討論
第三章 Chordin A基因?qū)�金魚(yú)及其雜交魚(yú)尾型的影響研究
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)用魚(yú)、胚胎及質(zhì)粒
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        3.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 分子檢測(cè)及測(cè)序
        3.2.2 整胚原位雜交
        3.2.3 Chordin A基因的敲除
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
        3.3.1 金魚(yú)及其雜交魚(yú)PCR擴(kuò)增結(jié)果分析
        3.3.2 金魚(yú)及其雜交魚(yú)品系尾型及Chordin A基因型分析
        3.3.3 雙尾型金魚(yú)P₀代雜交后代表型的分析
        3.3.4 整胚原位雜交結(jié)果比較
        3.3.5 單尾型Chordin A基因的敲除及檢測(cè)
    3.4 討論
結(jié)論與展望
參考文獻(xiàn)
附錄：英文縮略語(yǔ)表
致謝
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本文編號(hào)：3985763