發(fā)布時間：2024-06-07 18:50

　　Dmrt (Doble-sex and mab-3 relatated transcription factor)基因的主要功能是決定性別、分化性腺和形成組織和器官。為研究其在三角帆蚌(Hyriopsis cumingii)性腺發(fā)育和分化過程中的作用,本實驗通過比對三角帆蚌轉錄組序列和RACE擴增的方法,獲得了三角帆蚌Dmrt1基因(HcDmrt1)全長cDNA,采用實時定量PCR的方法研究該基因在性腺發(fā)育和分化的表達情況。結果顯示,HcDmrt1基因全長為1 561 bp,ORF區(qū)(開放閱讀框區(qū)域) 1 161 bp,編碼386個氨基酸。編碼蛋白具有DM (Doublesex/MAB-3) Domain family保守結構域。三角帆蚌2～10月齡個體性腺熒光定量結果顯示該基因參與了早期性腺發(fā)育;組織熒光定量結果顯示,HcDmrt1在各組織中均有表達,但是在雌雄性腺組織中表達差異最大,雄性中表達量明顯高于雌性。性腺的原位雜交結果顯示,該基因主要在卵母細胞的細胞膜上檢測到表達信號,在雄性性腺中,主要在濾泡腔中的精細胞觀察到信號。由此推測,HcDmrt1基因參與了三角帆蚌的性腺發(fā)育過程。

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【部分圖文】：

圖1三角帆蚌HcDmrt1基因cDNA全長及推導的氨基酸序列

對HcDmrt1基因ORF區(qū)進行同源性檢測，發(fā)現(xiàn)其與池蝶蚌(Hyriopsisschlegelii)同源性最高。通過ClustalW軟件將HcDmrt1與其他物種的Dmrt1對比，再使用MEGA6.0建立NJ系統(tǒng)進化樹(圖4)。通過分析發(fā)現(xiàn)三角帆蚌與池蝶蚌(Hyriopsis....

圖2Phyre2預測的HcDmrt1蛋白三級結構預測

圖1三角帆蚌HcDmrt1基因cDNA全長及推導的氨基酸序列1.5HcDmrt1基因的組織表達差異分析

圖3HcDmrt1與不同物種Dmrt1氨基酸序列比對

各組織熒光定量結果顯示(圖5),HcDmrt1在雄性中的相對表達量都比雌性高，在性腺和外套膜中的表達差異極顯著；斧足中表達差異顯著，在肝和鰓中表達差異不顯著。2～10月齡性腺熒光定量結果顯示(圖6),HcDmrt1在2月左右高表達，隨后表達量下降，在5～7月齡左右表達量再次上升，....

圖3HcDmrt1與不同物種Dmrt1氨基酸序列比對

圖3HcDmrt1與不同物種Dmrt1氨基酸序列比對圖4不同物種HcDmrt1基因氨基酸序列構建的NJ系統(tǒng)進化樹

本文編號：3990949