發(fā)布時間：2025-05-27 03:51

　　牙鲆彈狀病毒(Hirame rhabdovirus,HRV)是彈狀病毒科粒外彈狀病毒屬新成員,具有強烈的致病性,給全球海水養(yǎng)殖業(yè)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟損失。病毒在入侵宿主細(xì)胞的過程中,宿主細(xì)胞通過模式識別受體(pattern recognition receptors,PRRs)監(jiān)測病原相關(guān)分子模式(pathogen associated molecular patterns,PAMPs)而感知病毒的入侵,并通過信號通路的級聯(lián)傳遞,協(xié)調(diào)病毒感染早期宿主反應(yīng),并隨即激活宿主獲得性免疫反應(yīng)。然而,通過和宿主的相互作用,RNA病毒進(jìn)化出逃逸宿主RLRs免疫監(jiān)視的不同策略來干擾宿主RLRs抗病毒信號,阻斷RLRs信號的傳導(dǎo),從而導(dǎo)致宿主發(fā)病。多數(shù)情況下,病毒傾向于利用非結(jié)構(gòu)蛋白進(jìn)行此功能。而HRV致病機制及逃逸宿主免疫監(jiān)視的分子機制還沒有得到明確的闡述。本研究根據(jù)Gen Bank中HRV中國株全長基因序列設(shè)計特異性引物,用RT-PCR方法從病毒懸液中分段擴增HRV全長基因組序列,得到的基因序列拼接后,經(jīng)BLAST比對發(fā)現(xiàn)與中國株的同源性達(dá)到99.77%,為后續(xù)獲得感染性克隆奠定基礎(chǔ)。根據(jù)Gen Ban...

【文章頁數(shù)】：56 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略語表
第一章 前言
    1 牙鲆彈狀病毒概況
        1.1 發(fā)現(xiàn)及流行
        1.2 分類地位
        1.3 基因組編碼蛋白特征
        1.4 HRV的檢測方法
    2 宿主抗病毒感染的免疫機制
        2.1 宿主對RNA病毒的識別及免疫監(jiān)視機制
        2.2 病毒逃逸宿主免疫監(jiān)視的機制
    3 本文研究目的及意義
第二章 HRV全長基因組的擴增與分析
    1 材料與方法
        1.1 材料
        1.2 方法
    2 結(jié)果
        2.1 HRV病毒的增殖
        2.2 HRV的RT-PCR鑒定
        2.3 HRV全長基因組序列的獲得
    3 討論
第三章 NV基因的擴增及序列分析
    1 材料與方法
        1.1 材料
        1.2 方法
    2 結(jié)果
        2.1 NV基因的擴增及條件優(yōu)化
        2.2 克隆質(zhì)粒的鑒定及測序
        2.3 NV基因序列及編碼蛋白的結(jié)構(gòu)分析
    3 討論
        3.1 NV基因的擴增及重組克隆
        3.2 NV蛋白的序列分析
第四章 HRV非結(jié)構(gòu)蛋白的表達(dá)及其特性研究
    1 材料與方法
        1.1 材料
        1.2 方法
    2 結(jié)果
        2.1 表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建
        2.2 目的蛋白表達(dá)及IPTG濃度的優(yōu)化
        2.3 抗HRV多克隆抗體效價的測定
        2.4 目的蛋白的Western-blotting檢測
        2.5 間接ELISA檢測表達(dá)蛋白
    3 討論
結(jié)語
參考文獻(xiàn)
附錄 1
附錄 2
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文及課題資助
致謝



本文編號：4047465