干旱脅迫下蘋果miRNAs的表達(dá)分析及功能研究
發(fā)布時(shí)間：2020-12-15 11:12
MiRNAs是一類內(nèi)源性的小分子RNA,長(zhǎng)度大約21-24 nt。MiRNAs通過(guò)與靶標(biāo)互作參與調(diào)控植物的生長(zhǎng)發(fā)育、形態(tài)建成、果實(shí)發(fā)育、對(duì)生物和非生物脅迫的響應(yīng)等。近年來(lái)隨著高通量測(cè)序和生物信息學(xué)的發(fā)展,越來(lái)越多的miRNAs已經(jīng)被鑒定。蘋果是一種重要的經(jīng)濟(jì)作物。干旱脅迫會(huì)影響蘋果的產(chǎn)量和品質(zhì),因此對(duì)其抗旱性的研究具有重要的價(jià)值。miRBase-2.1中記錄有206個(gè)蘋果特異的pre-miRNA,207個(gè)成熟miRNAs,但是與抗旱相關(guān)的miRNAs卻鮮有報(bào)道。本研究利用高通量測(cè)序分析平邑甜茶和富平楸子兩種蘋果砧木中與抗旱相關(guān)的miRNAs,篩選差異表達(dá)的miRNAs進(jìn)行qRT-PCR鑒定。選擇與抗旱相關(guān)的miRNAs進(jìn)行過(guò)表達(dá)和轉(zhuǎn)基因研究,結(jié)果如下:（1）對(duì)測(cè)序結(jié)果中篩選的14個(gè)已知miRNAs和12個(gè)新型miRNAs進(jìn)行qRT-PCR驗(yàn)證,結(jié)果顯示10個(gè)已知miRNAs和10個(gè)新型miRNAs的表達(dá)量變化趨勢(shì)與測(cè)序結(jié)果一致。而mdm-MIR7121d-p3和PC-5p-101486130的溶解曲線沒(méi)有峰值;mdm-miR477b、mdm-miR7122a、md...
【文章來(lái)源】：西北農(nóng)林科技大學(xué)陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校
【文章頁(yè)數(shù)】：82 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
植物miRNAs的合成途徑(OlivierVoinnet2009)
圖 2-1 總 RNA 提取結(jié)果Fig. 2-1 Total RNA extraction resul表 2-5 新型 miRNAsTable 2-5 Novel miRNAsseq lenup/downPv(t_CTTGGACC22 up5.505AACCCTC21 up2.704CCTGCTT21 up1.905CAACAACT24 up5.905CTTGTCC20 up5.204AGGACA21 up7.704
第二章 蘋果 miRNA 的差異表達(dá) 型 miRNAs 符合測(cè)序結(jié)果，其中 mdm-MIR7121d-p3 和 PC-5p-101486_130 的溶解曲線沒(méi)有峰值；mdm-miR477b 、mdm-miR7122a、mdm-miR393a 和 mdm-miR156t 的溶解曲線雖然是單峰，但是定量結(jié)果與測(cè)序不符合。2.3.3.1 內(nèi)參的表達(dá)分析根據(jù)上述選擇的三個(gè)內(nèi)參，設(shè)計(jì)引物進(jìn)過(guò)實(shí)時(shí)定量 PCR，根據(jù)三個(gè)內(nèi)參的擴(kuò)增曲線和溶解曲線（圖 2-2）確定最終的內(nèi)參選擇。
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]過(guò)表達(dá)番茄Sly-miR397基因增強(qiáng)擬南芥的耐旱性[J]. 向娟,林鵬,李興盛,李雙桃,劉夢(mèng)云,張磊,郭仰東. 中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2016(10)
[2]microRNA表達(dá)檢測(cè)技術(shù)進(jìn)展[J]. 張宇,張勇,楊長(zhǎng)成,王振寧. 新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào). 2008(06)
[3]Identification and characterization of new plant microRNAs using EST analysis[J]. George P.COBB1,Todd A.ANDERSON. Cell Research. 2005(05)
[4]水分脅迫對(duì)冬小麥CO2同化作用的影響[J]. 薛崧,汪沛洪,許大全,李立人. 植物生理學(xué)報(bào). 1992(01)
碩士論文
[1]玉米紋枯病脅迫響應(yīng)相關(guān)miRNA的功能研究[D]. 韓素芬.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
本文編號(hào)：2918171
【文章來(lái)源】：西北農(nóng)林科技大學(xué)陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校
【文章頁(yè)數(shù)】：82 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
植物miRNAs的合成途徑(OlivierVoinnet2009)
圖 2-1 總 RNA 提取結(jié)果Fig. 2-1 Total RNA extraction resul表 2-5 新型 miRNAsTable 2-5 Novel miRNAsseq lenup/downPv(t_CTTGGACC22 up5.505AACCCTC21 up2.704CCTGCTT21 up1.905CAACAACT24 up5.905CTTGTCC20 up5.204AGGACA21 up7.704
第二章 蘋果 miRNA 的差異表達(dá) 型 miRNAs 符合測(cè)序結(jié)果，其中 mdm-MIR7121d-p3 和 PC-5p-101486_130 的溶解曲線沒(méi)有峰值；mdm-miR477b 、mdm-miR7122a、mdm-miR393a 和 mdm-miR156t 的溶解曲線雖然是單峰，但是定量結(jié)果與測(cè)序不符合。2.3.3.1 內(nèi)參的表達(dá)分析根據(jù)上述選擇的三個(gè)內(nèi)參，設(shè)計(jì)引物進(jìn)過(guò)實(shí)時(shí)定量 PCR，根據(jù)三個(gè)內(nèi)參的擴(kuò)增曲線和溶解曲線（圖 2-2）確定最終的內(nèi)參選擇。
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]過(guò)表達(dá)番茄Sly-miR397基因增強(qiáng)擬南芥的耐旱性[J]. 向娟,林鵬,李興盛,李雙桃,劉夢(mèng)云,張磊,郭仰東. 中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2016(10)
[2]microRNA表達(dá)檢測(cè)技術(shù)進(jìn)展[J]. 張宇,張勇,楊長(zhǎng)成,王振寧. 新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào). 2008(06)
[3]Identification and characterization of new plant microRNAs using EST analysis[J]. George P.COBB1,Todd A.ANDERSON. Cell Research. 2005(05)
[4]水分脅迫對(duì)冬小麥CO2同化作用的影響[J]. 薛崧,汪沛洪,許大全,李立人. 植物生理學(xué)報(bào). 1992(01)
碩士論文
[1]玉米紋枯病脅迫響應(yīng)相關(guān)miRNA的功能研究[D]. 韓素芬.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
本文編號(hào)：2918171
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