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蘋果腐爛病菌VmHMG7基因的分離及功能分析

發(fā)布時間:2024-05-28 20:25
  蘋果腐爛病是我國蘋果產(chǎn)業(yè)的重大生物災(zāi)害,發(fā)生普遍,為害嚴重,Valsa mali var.mali是引起蘋果腐爛病的主要病原真菌,深入研究病菌的生長發(fā)育及分子致病機制可為病害的科學(xué)防控提供理論依據(jù),分離克隆和調(diào)控病菌生長發(fā)育和致病相關(guān)基因,進而研究這些基因的功能,可揭示腐爛病菌生長發(fā)育及致病分子機制。本研究以ATMT介導(dǎo)的突變體庫中已篩選出的菌落形態(tài)、生長和致病性均出現(xiàn)變異的突變體FL550為出發(fā)菌株,通過側(cè)翼序列擴增,分離克隆了蘋果腐爛病菌HMG(VmHMG7)基因,利用生物信息學(xué)方法,從蘋果腐爛病菌全基因組數(shù)據(jù)庫中鑒定出HMG-box家族,利用MEGA5軟件對基因家族進行了系統(tǒng)進化分析,利用MapDRAW及GSDS方法進行了基因家族成員的結(jié)構(gòu)及染色體定位;利用融合PCR技術(shù)將VmHMG7基因上下游片段與及潮霉素篩選標記基因(hygromycin phosphotransferase gene,HPH)構(gòu)建敲除載體,應(yīng)用PEG-CaCl2介導(dǎo)原生質(zhì)體,將敲除載體轉(zhuǎn)化到野生型菌株中,然后經(jīng)過潮霉素的篩選、PCR擴增和Southern雜交,獲得了敲除突變體。將敲除前...

【文章頁數(shù)】:71 頁

【學(xué)位級別】:碩士

【部分圖文】:

圖1.1經(jīng)典的HMG蛋白的分類Figure1.1ClassificationofclassicalHMGproteins

圖1.1經(jīng)典的HMG蛋白的分類Figure1.1ClassificationofclassicalHMGproteins

蘋果腐爛病菌VmHMG7基因的分離及功能分析狀態(tài),如圖1.1(Cateetal.,2010)。表1.1HMG-box結(jié)構(gòu)域中的保守序列Table1.1ConservedsequenceofHMG-boxdomains亞家族結(jié)構(gòu)域一致核心序列分布MA....


圖1.2柄孢霉中HMG-box基因的遺傳網(wǎng)絡(luò)(引自AitBenkhalietal.,2013)

圖1.2柄孢霉中HMG-box基因的遺傳網(wǎng)絡(luò)(引自AitBenkhalietal.,2013)

蘋果腐爛病菌VmHMG7基因的分離及功能分析遺傳分析顯示,該網(wǎng)絡(luò)還調(diào)控不受交-box成員在真菌中的重要作用,12個HMG5和SpSte11是交配型基因的保5.5億年前進化分分離,兩種HMG-box的性別決定中發(fā)揮重要作用。P.aseri因子形成的HMG-bo....


圖2.1敲除載體的構(gòu)建及突變體PCR驗證示意圖

圖2.1敲除載體的構(gòu)建及突變體PCR驗證示意圖

圖2.1敲除載體的構(gòu)建及突變體PCR驗證示意圖Fig.2.1ConstructionoftheknockoutvectorandthemutantdetectionbyPCRCTAB法快速提取突變體DNA,方法見步驟2.2.2。用四對引物(....


圖3.1hiTAIL-PCR產(chǎn)物電泳條帶Fig.3.1ElectrophoreticbandofhiTAIL-PCR

圖3.1hiTAIL-PCR產(chǎn)物電泳條帶Fig.3.1ElectrophoreticbandofhiTAIL-PCR

圖3.1hiTAIL-PCR產(chǎn)物電泳條帶Fig.3.1ElectrophoreticbandofhiTAIL-PCR分別代表第二三步反應(yīng)產(chǎn)物,Marker為DM2000maker,白線指示條帶為因的分析體的特異性片段切膠回收,連接至pMD18-T載體,單....



本文編號:3983684

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