發(fā)布時(shí)間：2025-07-02 23:37

　　 為解析黃花菜LHY基因的開(kāi)花時(shí)間生物學(xué)功能和調(diào)控機(jī)理,本試驗(yàn)以大同黃花（Hemerocallis citrina cv.‘DatongHuanghua’）為材料,通過(guò)轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫(kù)檢索和PCR技術(shù)克隆了黃花菜生物鐘基因HcLHY,分析了該基因的生物信息學(xué)、系統(tǒng)發(fā)育和時(shí)空表達(dá)特性。結(jié)果表明:該基因cDNA全長(zhǎng)共計(jì)1 929 bp,編碼642個(gè)氨基酸,蛋白相對(duì)分子量為69 470.67 D,理論等電點(diǎn)（pI）為5.82。生物信息學(xué)預(yù)測(cè)其為親水蛋白,不具有跨膜結(jié)構(gòu)域;其為轉(zhuǎn)錄因子,定位于細(xì)胞核中,不具備信號(hào)肽,該基因所編碼蛋白的N端具有典型的Myb DNAbinding保守結(jié)構(gòu)域;系統(tǒng)發(fā)育分析顯示,HcLHY蛋白與蘆筍AoLHY（XP₀20245416.1）親緣關(guān)系最近,同時(shí)發(fā)現(xiàn)不同植物的LHY蛋白保守結(jié)構(gòu)域也有較高的相似性,在被子植物生物鐘系統(tǒng)中的功能高度保守;時(shí)空表達(dá)特性分析HcLHY基因在開(kāi)花前-12 h表達(dá)量最高,且在花瓣中表達(dá)量最高,顯著高于葉片、雌蕊、雄蕊、花萼及根。此結(jié)果為以黃花菜為生物鐘模式植物的分子生物學(xué)研究提供了借鑒,為進(jìn)一步通過(guò)遺傳和外源影響開(kāi)花時(shí)間...

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圖1 不同時(shí)期黃花菜樣品

本課題組前期觀察發(fā)現(xiàn),在連續(xù)晴朗的天氣下,大同黃花花蕾通常在17:50—18:10開(kāi)口（即花被片和花萼都打開(kāi)，雌蕊雄蕊同時(shí)出現(xiàn)在花被片中間）[13],在本試驗(yàn)將開(kāi)口（18:00）定義為0h，以0h為對(duì)照前后每隔6h采1次樣，具體見(jiàn)圖1。另外采集-12h(6:00）的根、葉....

圖2 HcLHY基因的序列分析

以黃花菜開(kāi)口前-12h(6:00）樣品的cDNA為模板，以c33464-F/R為引物，克隆HcLHY基因的cDNA全長(zhǎng)共計(jì)2126bp。經(jīng)NCBI-ORFFinder分析，得到HcLHY基因ORF區(qū)，片段長(zhǎng)1929bp，編碼642個(gè)氨基酸。此外，將克隆到的序列....

圖3 HcLHY蛋白分析

利用ProtParam軟件對(duì)HcLHY基因編碼氨基酸進(jìn)行基本理化性質(zhì)預(yù)測(cè)(表1),HcLHY蛋白屬不穩(wěn)定蛋白，不穩(wěn)定指數(shù)(InstabilityindexII)為53.88（大于40），相對(duì)分子量為69470.67D，理論等電點(diǎn)(pI)為5.82。80個(gè)帶負(fù)電荷氨基酸殘基....

圖4 HcLHY蛋白序列比較及保守結(jié)構(gòu)域motif

使用MEGA5.0構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)，分析HcLHY蛋白與其他物種LHY同源蛋白的進(jìn)化關(guān)系，結(jié)果如圖5所示，HcLHY與同為百合科的蘆筍蛋白聚在一支，親緣關(guān)系最近，與非洲油棕、海棗親緣關(guān)系較近。圖5LHY蛋白系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)分析

本文編號(hào)：4055418