發(fā)布時間：2020-10-27 01:12

　　 根結(jié)線蟲是山東省設(shè)施蔬菜中普遍存在的一種植物寄生性線蟲,每年都會造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失,成為制約設(shè)施蔬菜發(fā)展的重要因素�；瘜W(xué)農(nóng)藥的使用造成環(huán)境污染和生態(tài)破壞,同時也對蔬菜作物的品質(zhì)有很大的影響,生物防治受到人們的關(guān)注。本研究對山東省部分設(shè)施蔬菜進(jìn)行樣品采集,鑒定根結(jié)線蟲的種類,并以此為依據(jù)探究生防菌株AMCC1001028對南方根結(jié)線蟲的生防試驗和生防菌株發(fā)酵工藝條件的初步優(yōu)化。主要獲得以下結(jié)果:(1)對山東德州、濟(jì)南、濰坊和臨沂四個地區(qū)的七個地點進(jìn)行采樣,檢測土樣中的蟲口密度和線蟲的種類。結(jié)果表明,樣品中根結(jié)線蟲種群密度最高的為96.2 ind·g~(-1)soil。利用SCAR-PCR檢測四種常見根結(jié)線蟲,能夠檢測到南方根結(jié)線蟲、花生根結(jié)線蟲和北方根結(jié)線蟲,其中單獨侵染樣品有6份,復(fù)合侵染樣品有1份,南方根結(jié)線蟲為優(yōu)勢種群。(2)生防菌株AMCC1001028發(fā)酵上清液對南方根結(jié)線蟲的二齡幼蟲的致死試驗結(jié)果表明,該菌株培養(yǎng)48h發(fā)酵上清液處理二齡幼蟲12h和24h的校正致死率分別為87.22%和100%,并且經(jīng)過酸堿處理和冷熱處理依然有很高的殺線蟲活性。生防菌AMCC1001028的盆栽試驗表明,使用該生防菌處理50d番茄的根結(jié)數(shù)和卵囊數(shù)分別降低了28.81%和50.85%。說明該生防菌有防治根結(jié)線蟲的生防潛力,具有一定的開發(fā)前景。(3)生防菌株AMCC1001028的發(fā)酵條件優(yōu)化。通過對十種現(xiàn)有的基礎(chǔ)培養(yǎng)基進(jìn)行篩選,確定了一組菌體量和芽孢數(shù)最高的培養(yǎng)基作為發(fā)酵優(yōu)化的基礎(chǔ)培養(yǎng)基。對搖瓶培養(yǎng)條件進(jìn)行單因素試驗,確定了最佳培養(yǎng)溫度為37℃,最佳裝液量為10%,最佳接種量為4%,最佳初始pH為7.0。通過單因素試驗驗證了發(fā)酵基礎(chǔ)培養(yǎng)基中玉米粉為最佳碳源,發(fā)酵基礎(chǔ)培養(yǎng)基中豆餅粉為最佳氮源。通過進(jìn)行Plackett-Burman試驗篩選出對菌體量有顯著影響的因素為玉米粉、豆餅粉和碳酸鈣。利用Box-Behnken中心組合設(shè)計對三個顯著因素進(jìn)行優(yōu)化,確定了三者的最優(yōu)點為X_1=2.94,X_2=2.46,X_3=0.18。優(yōu)化后的發(fā)酵培養(yǎng)基為玉米粉29.4g/L,豆餅粉24.6g/L,碳酸鈣1.82 g/L,硫酸銨1.0g/L,硫酸鎂0.1g/L,磷酸二氫鉀2.1g/L,硫酸錳0.5g/L。利用優(yōu)化培養(yǎng)基進(jìn)行發(fā)酵,檢測發(fā)酵液菌體量為1.50×10~(10)CFU/mL,比發(fā)酵基礎(chǔ)培養(yǎng)基提高了30.43%。
【學(xué)位單位】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：S476;S436.3;TQ920.6
【部分圖文】：

鑒定方法是形態(tài)學(xué)特征鑒定。鑒定四種最常見根紋、雌蟲的口針、雄蟲的頭部和口針以及二齡幼，會陰花紋比較容易準(zhǔn)備光鏡檢查的切片。表 1-1 四種常見根結(jié)線蟲的重要形態(tài)學(xué)特征總結(jié)ary of important diagnostic characters of the four most common Melo弓 側(cè)脊 條紋 ，方形側(cè)脊無，條紋有裂痕、分叉粗糙，光滑，波浪狀有時是鋸齒狀，圓形 明顯的側(cè)脊粗糙，光滑，略帶波浪，圓形，近側(cè)方凹痕側(cè)脊無，條紋短、不規(guī)則、分叉粗糙，光滑，略帶波浪，圓形 側(cè)脊無細(xì)膩，光滑，略帶波浪

濰坊壽光 黃瓜 15.3 M. incognita M臨沂沂水 甜瓜 23.7 M. incognit臨沂莒南 甜瓜 13.5 M. arenari濟(jì)南濟(jì)陽 茄子 29.1 M. incognit濰坊壽光 絲瓜 96.2 M. incognit德州德州 番茄 43.5 M. incognit看出不同蔬菜種植地區(qū)根結(jié)線蟲病害嚴(yán)重程度不物病蟲害嚴(yán)重程度也不相同，壽光地區(qū)的絲瓜地區(qū)的黃瓜蟲口密度為 15.3 ind·g-1soil。R-PCR 鑒定根結(jié)線蟲的特異性引物對山東地區(qū)部分蔬菜大棚 鑒定，并根據(jù)擴(kuò)增條帶確定根結(jié)線蟲的種類，電泳

圖 3-2 SCAR-PCR 擴(kuò)增結(jié)果（南方根結(jié)線蟲和北方根結(jié)線蟲Fig. 3-2 SCAR-PCR amplification results (M. ingenita and M. h注：M: DNA Marker DL 2000；1、2 南方根結(jié)線蟲；3、4 北方根-PCR 擴(kuò)增條帶的結(jié)果可知，在 7 份樣品中檢測南方根結(jié)線蟲，1 份為花生根結(jié)線蟲；復(fù)合侵染線蟲混合種群，未檢測到爪哇根結(jié)線蟲。從調(diào)查線蟲為主，為下一步試驗提供了依據(jù)。CC1001028 生防試驗蟲的獲取
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本文編號：2857796