發(fā)布時間：2020-11-18 19:19

　　 南方水稻黑條矮縮病毒S9-1被預(yù)測能編碼病毒基質(zhì)蛋白。病毒基質(zhì)蛋白是病毒復(fù)制增殖的關(guān)鍵。因此我們研究抗病毒病活性小分子與SRBSDV P9-1的相互作用及結(jié)合方式,可以為新型高效的抗病毒藥物的研制打下一定基礎(chǔ)。本研究以原核表達(dá)方式獲取南方水稻黑條矮縮病毒(South rice black-streaked dwarf virus,SRBSDV)P9-1為靶標(biāo)蛋白,通過微量熱泳動法、等溫滴定量熱法技術(shù)對33個抗病毒活性小分子進(jìn)行初篩,針對作用MST、ITC結(jié)果差異較大的化合物進(jìn)行成鹽,并采用計算機(jī)分子對接計算出抗病毒活性小分子與SRBSDV P9-1的結(jié)合位點,通過定點突變PCR法對野生型SRBSDV P9-1質(zhì)粒進(jìn)行突變,利用原核表達(dá)獲取突變型的SRBSDV P9-1,最終通過微量熱泳動法、等溫滴定量熱法來驗證藥物與蛋白的結(jié)合力。實驗結(jié)果表明:利用定點突變PCR法成功獲得突變質(zhì)粒,通過三種方法的研究結(jié)果表明,將P9-1的精氨酸7、精氨酸110、精氨酸327位突變后,其與小分子X2、X7的結(jié)合力弱于野生型與X2、X7的結(jié)合力,實驗所得結(jié)果與計算機(jī)模擬結(jié)果一致,說明SRBSDV P9-1的7、110、327位精氨酸是X2、X7的關(guān)鍵結(jié)合位點;并通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法驗證X2在活體上的作用。
【學(xué)位單位】：貴州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：TQ460.1
【部分圖文】：

圖 1.1 RNAi 技術(shù)處理 dsP9-1 抑制病毒原質(zhì)形成Fig.1.1 Technical treatment of dsP9-1 inhibits virus formation，Mao 等[15]用免疫熒光顯微等技術(shù)發(fā)現(xiàn) P5 與 P6、P6 與

SRBSDVP9-1功能

圖 1.3 SRBSDV P9-1-P6 相互作用Fig.1.3 Interaction between SRBSDV P9-1 and SRBSDV P616 年，吳錦鴻等[18]通過克隆 SRBSDV 的 P9- 1 基因，利用 Gateway 相體及方法得到表達(dá)載體 pDEST17-P9-1。IPTG 誘導(dǎo)大量表達(dá)蛋白，免
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本文編號：2889102