α-乳白蛋白源DPP-4抑制肽的制備以及結(jié)構(gòu)解析與功能評(píng)價(jià)
發(fā)布時(shí)間:2025-06-18 23:46
糖尿病是全球三大流行病之一,其中二型糖尿病(T2DM)占90%以上。近些年來(lái),具有比化學(xué)合成類(lèi)藥物更多優(yōu)勢(shì)的食品源降糖物質(zhì)被開(kāi)發(fā)出來(lái)并得以應(yīng)用,如谷類(lèi)蛋白,魚(yú)肉蛋白及乳蛋白。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道,α乳白蛋白作為DPP-4抑制肽的來(lái)源具有較高的潛力。因此,本文以商品化的α-乳白蛋白為原料,利用中心組合-響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)(CCD-RSM)水解樣品,經(jīng)過(guò)分離純化,鑒定與合成,得到DPP-4活性肽序列,進(jìn)行體外抑制活性及功能的化學(xué)驗(yàn)證及模型細(xì)胞驗(yàn)證。主要結(jié)論如下:1、α-葡萄糖苷酶和二肽基肽酶Ⅳ(DPP-4)是Ⅱ型糖尿病的治療中兩種重要的靶向酶。市售的商品化酶來(lái)源主要為微生物源,與哺乳動(dòng)物來(lái)源的酶的性質(zhì)有一定的差異,難以客觀的評(píng)價(jià)這兩種酶的抑制劑的篩選。本研究收集新鮮的豬小腸黏膜分泌物及上皮細(xì)胞,以現(xiàn)有商業(yè)化酶做對(duì)照,分析不同部位豬小腸黏膜提取物的α-葡萄糖苷酶和DPP-4酶活及比活力,確定合適的稀釋倍數(shù)及有效部位,建立了豬小腸源α-葡萄糖苷酶和DPP-4的酶活測(cè)定體系,為本研究α-葡萄糖苷酶和DPP-4抑制劑的體外篩選提供可靠的測(cè)定方法體系及低廉的酶來(lái)源。2、為了更有效的獲得來(lái)源于α乳白蛋白源的DPP-4抑制...
【文章頁(yè)數(shù)】:70 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【文章目錄】:
摘要
abstract
英文縮略表
第一章 引言
1.1 糖尿病及其防止機(jī)理
1.1.1 糖尿病概述
1.1.2 二型糖尿病(T2D)的治療機(jī)理
1.1.3 二肽基肽酶IV抑制劑作用機(jī)理
1.2 生物活性肽
1.2.1 生物活性肽種類(lèi)
1.2.2 生物活性肽制備方法
1.2.3 生物活性肽的分離純化
1.2.4 食品源生物活性肽
1.3 研究目的及意義
1.4 研究?jī)?nèi)容
第二章 α葡萄糖苷酶和二肽基肽酶IV活性評(píng)價(jià)體系的確立
2.1 引言
2.2 材料和方法
2.2.1 材料和試劑
2.2.2 儀器與設(shè)備
2.2.3 試驗(yàn)方法
2.3 結(jié)果與討論
2.3.1 豬小腸不同部位的黏膜提取物的α-葡萄糖苷酶酶活
2.3.2 豬小腸不同部位黏膜提取物的DPP-4 酶活
2.3.3 抑制率的驗(yàn)證—抑二肽素驗(yàn)證
2.4 小結(jié)
第三章 α乳白蛋白源DPP-4 抑制肽的酶解條件優(yōu)化
3.1 引言
3.2 材料和方法
3.2.1 材料和試劑
3.2.2 儀器與設(shè)備
3.2.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)
3.2.4 試驗(yàn)方法
3.3 結(jié)果與討論
3.3.1 蛋白含量與酶活力
3.3.2 酶解條件單因素的篩選
3.3.3 中心組合設(shè)計(jì)(CCD)獲得水解產(chǎn)物
3.3.4 不同因子及其相互作用對(duì)水解產(chǎn)物DPP-4 抑制活性的影響
3.4 小結(jié)
第四章 α-乳白蛋白源DPP-4 抑制肽的分離純化與鑒定
4.1 引言
4.2 材料和方法
4.2.1 材料和試劑
4.2.2 儀器與設(shè)備
4.2.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)
4.2.4 試驗(yàn)方法
4.2.5 數(shù)據(jù)分析
4.3 結(jié)果與討論
4.3.1 不同分子量范圍的組分的DPP-4 抑制活性
4.3.2 肽序列的鑒定
4.3.3 活性肽抑制類(lèi)型的確定
4.4 小結(jié)
第五章 α-乳白蛋白源DPP-4 抑制肽對(duì)H716 細(xì)胞內(nèi)DPP-4及GIP-1 的影響
5.1 引言
5.2 材料和方法
5.2.1 材料和試劑
5.2.2 儀器與設(shè)備
5.2.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)
5.2.4 試驗(yàn)方法
5.2.5 數(shù)據(jù)分析
5.3 結(jié)果與討論
5.3.1 利格列汀及活性肽的DPP-4 半數(shù)抑制濃度
5.3.2 最適目標(biāo)肽及陽(yáng)性藥的作用濃度的確定
5.3.3 細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)確定待測(cè)樣品最適培養(yǎng)濃度
5.3.4 待測(cè)樣品對(duì)細(xì)胞內(nèi)DPP-4 分泌的影響
5.3.5 待測(cè)樣品對(duì)細(xì)胞內(nèi)DPP-4 分泌的影響
5.4 小結(jié)
第六章 結(jié)論
6.1 主要結(jié)論
6.2 創(chuàng)新點(diǎn)
6.3 展望
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)介
本文編號(hào):4050522
【文章頁(yè)數(shù)】:70 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【文章目錄】:
摘要
abstract
英文縮略表
第一章 引言
1.1 糖尿病及其防止機(jī)理
1.1.1 糖尿病概述
1.1.2 二型糖尿病(T2D)的治療機(jī)理
1.1.3 二肽基肽酶IV抑制劑作用機(jī)理
1.2 生物活性肽
1.2.1 生物活性肽種類(lèi)
1.2.2 生物活性肽制備方法
1.2.3 生物活性肽的分離純化
1.2.4 食品源生物活性肽
1.3 研究目的及意義
1.4 研究?jī)?nèi)容
第二章 α葡萄糖苷酶和二肽基肽酶IV活性評(píng)價(jià)體系的確立
2.1 引言
2.2 材料和方法
2.2.1 材料和試劑
2.2.2 儀器與設(shè)備
2.2.3 試驗(yàn)方法
2.3 結(jié)果與討論
2.3.1 豬小腸不同部位的黏膜提取物的α-葡萄糖苷酶酶活
2.3.2 豬小腸不同部位黏膜提取物的DPP-4 酶活
2.3.3 抑制率的驗(yàn)證—抑二肽素驗(yàn)證
2.4 小結(jié)
第三章 α乳白蛋白源DPP-4 抑制肽的酶解條件優(yōu)化
3.1 引言
3.2 材料和方法
3.2.1 材料和試劑
3.2.2 儀器與設(shè)備
3.2.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)
3.2.4 試驗(yàn)方法
3.3 結(jié)果與討論
3.3.1 蛋白含量與酶活力
3.3.2 酶解條件單因素的篩選
3.3.3 中心組合設(shè)計(jì)(CCD)獲得水解產(chǎn)物
3.3.4 不同因子及其相互作用對(duì)水解產(chǎn)物DPP-4 抑制活性的影響
3.4 小結(jié)
第四章 α-乳白蛋白源DPP-4 抑制肽的分離純化與鑒定
4.1 引言
4.2 材料和方法
4.2.1 材料和試劑
4.2.2 儀器與設(shè)備
4.2.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)
4.2.4 試驗(yàn)方法
4.2.5 數(shù)據(jù)分析
4.3 結(jié)果與討論
4.3.1 不同分子量范圍的組分的DPP-4 抑制活性
4.3.2 肽序列的鑒定
4.3.3 活性肽抑制類(lèi)型的確定
4.4 小結(jié)
第五章 α-乳白蛋白源DPP-4 抑制肽對(duì)H716 細(xì)胞內(nèi)DPP-4及GIP-1 的影響
5.1 引言
5.2 材料和方法
5.2.1 材料和試劑
5.2.2 儀器與設(shè)備
5.2.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)
5.2.4 試驗(yàn)方法
5.2.5 數(shù)據(jù)分析
5.3 結(jié)果與討論
5.3.1 利格列汀及活性肽的DPP-4 半數(shù)抑制濃度
5.3.2 最適目標(biāo)肽及陽(yáng)性藥的作用濃度的確定
5.3.3 細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)確定待測(cè)樣品最適培養(yǎng)濃度
5.3.4 待測(cè)樣品對(duì)細(xì)胞內(nèi)DPP-4 分泌的影響
5.3.5 待測(cè)樣品對(duì)細(xì)胞內(nèi)DPP-4 分泌的影響
5.4 小結(jié)
第六章 結(jié)論
6.1 主要結(jié)論
6.2 創(chuàng)新點(diǎn)
6.3 展望
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)介
本文編號(hào):4050522
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