發(fā)布時間：2025-03-30 00:45

　　微生物在污染環(huán)境的生物修復方面具有重要作用,它們對環(huán)境污染物的降解是通過一系列酶來進行的。因此,研究污染物降解過程中關健酶的作用機理,對于闡明微生物對污染物的生物降解過程以及生物修復機制具有重要意義。蛋白質晶體學是利用X射線衍射技術對蛋白質的結構進行解析的一門學科,它能使我們從原子角度了解蛋白質的結構信息,結合蛋白質的功能特性,可以確定在實際催化過程中的功能基團及其作用方式,為定向改造提供重要信息。硝基苯是一種重要的化工原料和化學中間體,進入環(huán)境的硝基苯會長期殘留在水體和土壤里,對人類健康造成嚴重的危害。本文以硝基苯代謝途徑中的脫氨酶AmnE作為研究對象,利用Ni-NTA親和層析及Resource Q離子交換層析對重組表達于大腸桿菌BL21 (DE3)中的AmnE蛋白進行純化。利用懸滴氣相擴散法和商業(yè)結晶試劑盒進行結晶條件的篩選和優(yōu)化,并在0.2 M KCl、23% PEG3350、0.2 M Bis-Tris pH 7.5的結晶條件下獲得了高分辨率的蛋白晶體。AmnE晶體的分辨率為2.09A,屬于正交晶系,空間群為C2221,晶胞參數(shù)為a= 63.23 A、b= 88.93 A、c= ...

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－７蜜白質結晶過程示意圖??Ｋ．?１－７?Ｐｒｏｃｅｓｓ?ｏｆｒｏ化ｉｎ?ｃｒｓ化ｌｌｉｚａｔｉｏｎ??

的單晶的獲得是蛋白質晶體結構解析的前提。蛋白質結晶過程是一個有序化的過程，??即在溶液中處于隨機狀態(tài)的分子轉變成有序聚集的狀態(tài)。當溶液達到過飽和狀態(tài)時，??蛋白質牙可能開始結晶，如圖１－７。晶體生長包括晶核形成（包含１０至２００個分子的??聚集）和晶體長大（周圍的分子向晶核聚集）....

圖１－８晶體Ｘ射線巧射不意圖??

?使用接收器如ＣＣＤ記錄Ｘ射線散射的強度，Ｗ獲得與與晶體內(nèi)部的原子分布規(guī)律相??對應的特有的衍射圖譜，如圖１－８。在衍射數(shù)據(jù)收集時，一般先收集幾幅衍射圖譜檢??查晶體的衍射質量，如果出現(xiàn)衍射點弱、分辨率低、李晶等現(xiàn)象，就沒有必要繼續(xù)收??集數(shù)據(jù)。如果衍射質量不錯，則進行指標化處理....

圖２－１蛋白質的結晶方法??

初篩得到的晶體往往是微晶、奕晶或者衍射效果較差的晶體，所Ｗ需要對其初篩??的條件開展進一步的優(yōu)化工作。??Ｕ）采用懸滴氣相擴散法（如圖２－１）進行結晶條件的優(yōu)化具體操作步驟如下；??２６??

圖３－１?ＰＣ艮擴增產(chǎn)物??Ｆｉｇ．?３－１?ＰＣＲ?ｐｒｏｄｕｃｔ?ｏｆ?ＡｍｎＥ??

３．２．１?ＰＣ艮擴增??Ｗ公司合成的ａｍｎＥ基因作為模板，應用設計的特異性引物（如表２－３），進行??．Ｋ：民擴増，其產(chǎn)物經(jīng)１％瓊脂糖凝膠電泳檢測，結果如圖３－１。??Ｍ?１?■??６０００?ｂｐ－＾１??１０００?ｂｐ?－？接造皆?Ｉ??圖３－１?ＰＣ艮擴增產(chǎn)物??Ｆｉｇ．?....

本文編號：4037916