發(fā)布時間：2017-12-13 18:17

  本文關(guān)鍵詞：西藏高原紅景天遺傳多樣性與質(zhì)量分析比較

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【摘要】：紅景天在我國西藏自治區(qū)有32種,2個變種,約占全世界1/3。因其藥用價值高,紅景天屬亦于可用于保健食品的物品。因此西藏大花紅景天在臨床、保健食品、美容、化工等方面被大量作為主要原材料。對于西藏高原紅景天的關(guān)注程度極高,被譽為“高原人參”。同時經(jīng)常作為高原特產(chǎn),作為饋贈親朋好友的佳品,更重要的是可以用于國防集訓(xùn)、高原生產(chǎn)建設(shè)、高原旅游等方面,以緩解人體對高原缺氧的不適。但由于西藏高原處于低溫、缺氧、紫外線強、晝夜溫差大的氣候下,因此,紅景天生長周期緩慢,2009年被西藏自治區(qū)列為藏藥瀕危物種。如何破解需求量大,供求不足問題,本課題從以下幾個方面進行了相關(guān)研究。遺傳多樣性的研究：在紅景天遺傳多樣性方面,該課題首先對西藏拉薩市、山南地區(qū)、那曲地區(qū)、林芝地區(qū)、日喀則地區(qū)進行了資源調(diào)查、樣品采集。發(fā)現(xiàn)紅景天植物分布正在逐年改變生長區(qū)域,呈現(xiàn)動態(tài)分布。自然環(huán)境對紅景天生長起決定性的制約,本課題通過對西藏高原紅景天遺傳多樣性分析研究,對于今后紅景天資源分布的確定提供宏觀上的指導(dǎo),另一方面也呼吁人們加強對自然環(huán)境的保護。本課題對采集自林芝地區(qū)長鞭紅景天(R.fastigiata)、山南地區(qū)齒葉紅景天(R.serrata H.Ohba)、日喀則地區(qū)喜馬紅景天(R.himalensis)的紅景天離體枝條在昆明的室溫條件下進行了新梢生長,將采集的紅景天地上枝條樣品,取莖端部約10cm大小的莖尖,置1000ml燒杯中,加入100ml自來水培養(yǎng),新梢提取不同個體的基因組DNA,使用通用引物ITS1進行PCR擴增,結(jié)果四種紅景天存在較高的遺傳多樣性。同時進行了ITS序列測序,進行了分子鑒定,對獲得3個植株的完整片段的大花紅景天進行分析,表明分布于該區(qū)域的大花紅景天群體中有很高的遺傳多樣性。另外,本文發(fā)現(xiàn)的多樣性位點為進一步深入分析大花紅景天的遺傳多樣性提供了技術(shù)基礎(chǔ)和有效引物,也為今后設(shè)計區(qū)分大花紅景天與其它種類的特異的PCR引物提供了基礎(chǔ)。質(zhì)量評價方面：在紅景天化學成分定性定量分析中,采用HS-GC-MS對紅景天10個樣品進行揮發(fā)性成分分析,從中共分析鑒定了30個化合物,結(jié)果發(fā)現(xiàn)同種不同產(chǎn)地大花紅景天總離子流圖相似度在0.9以上；長鞭紅景天相似度接近大花紅景天,齒葉紅景天與大花紅景天相似度差異大。采用HPLC法測定紅景天樣品中紅景天苷和沒食子酸的含量,結(jié)果發(fā)現(xiàn)同種不同產(chǎn)地紅景天苷含量差異較大,有一個樣品沒有檢測到紅景天苷；沒食子酸含量每個樣品中均檢測到,但含量高低沒有規(guī)律性。采用LC-MS/MS法對大花紅景天主要化學成分進行分析。結(jié)果表明,不同產(chǎn)地大花紅景天藥材之間化學成分存在著差異。對不同產(chǎn)地大花紅景天中6個活性成分,建立定量分析方法,為其進一步利用提供依據(jù)。方法：采用30%乙醇提取樣品；Diamonsil C18色譜柱(250-4.6mm)；以乙腈(A)-0.3%磷酸溶液(B)為流動相進行梯度洗脫；檢測波長275nm,柱溫25℃。結(jié)果：沒食子酸、紅景天苷、酪醇、兒茶素、沒食子酸乙酯、對香豆酸分別在0.0382μg.ml-1～ 0.382μg.ml-1 (r=0.9998)、0.301μg.ml-1～3.01μg·ml-1 (r=0.9999)、0.0198μg.ml-1～ 0.198μg·ml-1(r=0.9996)、0.0171μg.ml-1～0.171μg.ml-1 (r=0.9996)、0.0045μg.ml-1～ 0.045μg.ml-1 (r= 0.9998)、0.00638μg.ml-1～0.0638μg.ml-1 (r= 0.9994)呈良好的線性關(guān)系,加樣回收率均符合含量測定要求。結(jié)論：該方法簡便,快速,準確,可用于同時對西藏高原大花紅景天中6個活性成分的含量測定。對青藏高原不同產(chǎn)地大花紅景天用紫外分光光度法測定多糖的含量。方法：采用硫酸-蒽酮法。檢測波長617nm。結(jié)果：線性范圍為1.0μg·ml-1～200.0μg·ml-1 (R= 0.9999).結(jié)論：本法方便快捷、準確可靠,可做為紅景天類藥材多糖的測定方法。藥效毒性是評價藥物質(zhì)量的重要指標之一,在紅景天藥效學和毒性比較研究中,對血栓形成及血流變的影響、耐缺氧試驗、對老年小鼠免疫及抗氧化功能的影響、對免疫功能低下小鼠免疫功能的影響進行了比較研究,結(jié)果發(fā)現(xiàn),在改善血流變、對免疫功能的方面,長鞭紅景天可以作為大花紅景天代用品；增強機體耐缺氧能力方面,齒葉紅景天可以作為大花紅景天替代品；三種紅景天的急性毒性研究結(jié)果,三種紅景天均屬無明顯毒性藥物或者藥物安全范圍較大藥物。
【學位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S567.239;R29

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