發(fā)布時(shí)間：2018-04-06 22:17

  本文選題：熱應(yīng)激　切入點(diǎn)：小鼠　出處：《中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)》2016年博士論文

【摘要】：夏季雌性哺乳動(dòng)物的繁殖性能普遍降低,這與熱應(yīng)激改變卵巢卵泡發(fā)育和顆粒細(xì)胞功能有關(guān)。熱應(yīng)激可分為急性和慢性?xún)煞N類(lèi)型。盡管有研究報(bào)道熱應(yīng)激損傷卵巢功能,但慢性熱應(yīng)激影響卵泡閉鎖和顆粒細(xì)胞凋亡的研究未見(jiàn)報(bào)道。本研究以小鼠為模型,分別開(kāi)展以下三部分實(shí)驗(yàn)：第一部分：探討急性熱應(yīng)激對(duì)中小卵泡發(fā)育的影響。實(shí)驗(yàn)選擇20只7周齡的雌性CD-1小鼠,隨機(jī)分成2組。實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前對(duì)小鼠進(jìn)行同期超排處理,實(shí)驗(yàn)期間,實(shí)驗(yàn)組小鼠每天置于37℃,相對(duì)濕度50%～50%的生化培養(yǎng)箱中熱應(yīng)激處理10h,其余時(shí)間和對(duì)照組一樣,置于25℃的鼠房中飼養(yǎng),熱應(yīng)激處理持續(xù)6天。期間,每天檢測(cè)小鼠的肛溫和體重,第6天熱應(yīng)激結(jié)束后對(duì)小鼠進(jìn)行超排處理,收集卵母細(xì)胞和卵巢,觀察超排卵數(shù)及卵泡閉鎖情況。研究結(jié)果表明：急性熱應(yīng)激可提高小鼠肛溫和超排卵母細(xì)胞數(shù)量,并降低體重。第二部分：探討慢性熱應(yīng)激誘發(fā)卵泡閉鎖的機(jī)理。將48只體況相似的3周齡CD～1雌鼠隨機(jī)分成兩組,實(shí)驗(yàn)組小鼠每天置于42℃,相對(duì)濕度50%～60%的生化培養(yǎng)箱中熱應(yīng)激處理3h,其余時(shí)間和對(duì)照組小鼠飼養(yǎng)條件一致,記錄每天的采食量,實(shí)驗(yàn)期為4周。分別在第7、14、21和28天熱應(yīng)激結(jié)束后稱(chēng)重,之后兩組各隨機(jī)選取6只小鼠,處死后收集血漿,測(cè)定雌二醇水平。同時(shí)摘取卵巢,一側(cè)卵巢用于分析卵泡閉鎖和顆粒細(xì)胞凋亡情況,另一側(cè)用于檢測(cè)熱應(yīng)激相關(guān)蛋白表達(dá)水平。研究結(jié)果表明：慢性熱應(yīng)激降低小鼠采食量、體重和血清雌二醇水平,增加卵巢組織熱休克蛋白HSP70的表達(dá),持續(xù)21天的慢性熱應(yīng)激增加有腔卵泡的閉鎖率及顆粒細(xì)胞凋亡水平。第三部分：探討熱應(yīng)激影響卵泡顆粒細(xì)胞凋亡的機(jī)理。(1)分離小鼠有腔卵泡,37℃或42℃培養(yǎng)24h,之后收集卵泡檢測(cè)HSP70和芳香化酶蛋白的表達(dá)水平。(2)分離小鼠卵巢顆粒細(xì)胞,37℃或42℃無(wú)血清培養(yǎng)12h或24h,之后檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)液中雌二醇水平和顆粒細(xì)胞HSP70、芳香化酶和Bim蛋白的表達(dá)水平。(3)分離小鼠卵巢,37℃或41℃處理2 h,分離顆粒細(xì)胞,一部分用于檢測(cè)HSP70、Bim、斷裂caspase-3和caspase-3蛋白的表達(dá),另一部分進(jìn)行有血清(24h)和無(wú)血清(6h)的培養(yǎng),觀察顆粒細(xì)胞表型變化,收集細(xì)胞分析相關(guān)蛋白表達(dá)水平。此外,有血清組還進(jìn)行臺(tái)盼藍(lán)、Hochest和TUNEL分析。(4)分離小鼠卵巢,37℃或41℃處理2h,分離原始卵泡和生長(zhǎng)卵泡繼續(xù)培養(yǎng)6h,然后收集卵泡分析HSP70的表達(dá)。研究結(jié)果表明：有腔卵泡熱應(yīng)激誘導(dǎo)HSP70表達(dá)并抑制芳香化酶表達(dá)；顆粒細(xì)胞熱應(yīng)激誘導(dǎo)HSP70表達(dá),顯著提高芳香化酶水平,降低培養(yǎng)液中雌二醇含量；卵巢熱應(yīng)激誘導(dǎo)分離培養(yǎng)顆粒細(xì)胞HSP70表達(dá),增加有血清組顆粒細(xì)胞的凋亡及HSP70、Bim和斷裂Caspase-3蛋白的表達(dá)；卵巢熱應(yīng)激后,原始卵泡HSP70表達(dá)水平顯著高于生長(zhǎng)卵泡。綜上結(jié)果,可得如下結(jié)論：(1)37℃熱應(yīng)激6天可增加小鼠超排卵母細(xì)胞數(shù)量,促進(jìn)中小卵泡發(fā)育；(2)42℃熱應(yīng)激21天可抑制小鼠顆粒細(xì)胞芳香化酶表達(dá),降低血清雌二醇水平,提高有腔卵泡閉鎖率和顆粒細(xì)胞凋亡水平。(3)Bim和caspase-3參與了熱應(yīng)激誘導(dǎo)的小鼠顆粒細(xì)胞凋亡。
[Abstract]:The effects of heat stress on the development of ovarian follicle and granular cell were studied . ( 3 ) The expression of HSP70 , Bim , cleaved caspase - 3 and caspase - 3 protein were isolated from mouse ovary , 37 鈩，

本文編號(hào)：1719150