發(fā)布時間：2018-01-15 17:01

  本文關鍵詞：亞砷酸鈉對人內(nèi)皮祖細胞效應及分子機制研究　出處：《吉林大學》2017年博士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】：地方性砷中毒嚴重威脅人類健康,天然生活飲用水含砷量過高引起的砷化物中毒已成為全球性公共衛(wèi)生問題,中國正是受砷危害最嚴重的國家之一。亞砷酸鈉是飲水污染中毒性最強、主要的砷化物存在形式。流行病學研究顯示砷中毒可以引發(fā)多種疾病,以皮膚損傷和周圍血管疾病最為常見,其中周圍血管性疾病經(jīng)久不愈是其防治中的棘手問題。血管內(nèi)皮祖細胞(EPCs)具有極強的增殖潛能,通過血液循環(huán)遷移并定居在受損傷血管的內(nèi)皮細胞層,分化為成熟的內(nèi)皮細胞對損傷的血管進行修復。業(yè)已證明EPCs在維護血管完整性及促進損傷血管的修復和再建過程起關鍵作用。關于亞砷酸鈉對人EPCs的損傷效應及其作用的分子機制研究尚未見報道。首先,本研究針對人EPCs存在的數(shù)量有限這一實際狀況,應用抗人CD34抗體包被的免疫磁珠從人臍靜脈內(nèi)皮分離出人源內(nèi)皮祖細胞。經(jīng)流式細胞術分析顯示該細胞表達VEGFR2(KDR)、CD34及CD133,符合早期內(nèi)皮祖細胞。并應用生物反應器 微載體培養(yǎng)系統(tǒng)對該細胞進行擴增培養(yǎng)。結果顯示這一培養(yǎng)系統(tǒng)與傳統(tǒng)的平皿培養(yǎng)相比較有更高的擴增效率,更好地保留了早期祖細胞標志性分子,并且具有更強的成管能力。從而建立了標準的細胞分離、檢測及體外富集方法,保障了本研究后續(xù)的機制研究對足量、優(yōu)質的人EPCs的需求。接著,在上述研究結果的基礎上系統(tǒng)地研究了亞砷酸鈉對人內(nèi)皮祖細胞的效應及分子機理。本研究結果表明亞砷酸鈉抑制EPCs增殖,呈典型的劑量 效應關系和時間 反應關系。亞砷酸鈉對EPCs有明顯的促凋亡作用,其作用隨暴露劑量的增加而增強。亞砷酸鈉抑制EPCs遷移和成管功能。上述結果表明亞砷酸鈉可能是通過抑制人EPCs增殖、促進EPCs凋亡、降低EPCs遷移和成管能力,導致周圍血管性疾病遷延不愈。為了進一步研究亞砷酸鈉對人內(nèi)皮祖細胞效應的分子機理,本研究通過基因表達譜進行研究。結果顯示亞砷酸鈉顯著地改變了人EPCs的基因表達譜,其中下調(diào)CYP1A1、AGT、IGF2表達水平,上調(diào)SFRP1、RPS6KA2、HTRA2表達,以及上調(diào)AXL、COL1A1、TPM1表達可能分別在亞砷酸鈉抑制EPCs增殖、誘導EPCs細胞凋亡和氧化應激反應中起重要作用;下調(diào)BMP2、CCL20、VTN表達以及下調(diào)BMP2、C3、AGT、APOH表達可能在亞砷酸鈉抑制EPCs遷移和成管功能中發(fā)揮作用。這部分結果應用實時定量RT-PCR進一步得到了驗證。項目研究結果揭示了砷化物引起血管損傷經(jīng)久不愈的細胞學基礎,為解釋砷化物對血管損傷的分子機理提供了新證據(jù),為地砷病血管損傷的防治提供了新思路。最后,本研究將轉錄因子OCT4轉入人臍靜脈內(nèi)皮細胞中,結果顯示OCT4的過表達促進細胞體外成管能力;改變了細胞基因表達譜,特別是EPCs特異性標記分子VEGFR2(KDR)、CD34及CD133顯著高表達;應用生物信息學分析顯示OCT4通過上調(diào)干細胞維持相關基因表達以及下調(diào)細胞分化相關基因表達改變血管內(nèi)皮細胞表型為EPCs。為人EPCs的獲取提供另一來源。
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本文編號：1429234