發(fā)布時間：2017-12-23 10:28

  本文關(guān)鍵詞：番茄SlSWEET11b基因的表達及遺傳轉(zhuǎn)化　出處：《沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： 番茄 SlSWEET11b 實時定量分析 瞬時表達 遺傳轉(zhuǎn)化

【摘要】：SWEET蛋白是一種新型的糖轉(zhuǎn)運蛋白,在糖的輸出轉(zhuǎn)運過程中起重要作用,近來的研究表明SWEET蛋白在擬南芥、水稻中,在離子的轉(zhuǎn)運過程、生長和發(fā)育、以及對環(huán)境的適應(yīng)性方面都起著重要作用。本課題組前期研究表明SlSWEETT11b基因在番茄果實中大量表達,該基因在番茄果實發(fā)育的過程中所發(fā)揮的具體作用還不清楚。本研究通過生物信息學(xué)及實時定量PCR方法明確SlSWEE7116基因的特征,并通過構(gòu)建基因的過表達和沉默載體,采用瞬時表達和穩(wěn)定遺傳轉(zhuǎn)化的方法對SlSlSWEET11b基因的功能進行初步分析,獲得的主要結(jié)果如下:1.根據(jù)番茄數(shù)據(jù)庫獲得SlSWWEET11b基因全長1124bp,由375個氨基酸編碼,跨膜結(jié)構(gòu)分析表明該基因具有7跨膜結(jié)構(gòu),包含兩個MtN3結(jié)構(gòu)域。與擬南芥SWEET家族的系統(tǒng)進化樹分析表明,該蛋白位于CladeⅡ。根據(jù)該分支其它SWEET蛋白的功能分析,該蛋白可能主要負責蔗糖和果糖的轉(zhuǎn)運。2.采用實時定量PCR技術(shù),對番茄果實的不同發(fā)育時期表達分析,結(jié)果表明SlSWEET11b基因在番茄花后21d表達量達到峰值,隨后下降。在果實成熟過程中,該基因的表達部位也不盡相同,其中在綠果期的膠質(zhì)胎座、轉(zhuǎn)色期的心室隔壁、紅果期的萼片與果實維管束中表達量較高。3.成功克隆到SlWEET11b基因的全長,采用雙酶切的方法進行過表達載體的構(gòu)建,同時利用Gateway技術(shù)構(gòu)建沉默表達載體。利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的番茄果實注射方法將構(gòu)建好的過表達和沉默載體在番茄花后21d的果實中進行瞬時表達,qRT-PCR結(jié)果分析表明過表達載體注射番茄果實3d后SlSWEET11b基因表達量明顯高于對照果實;同樣將構(gòu)建好的沉默載體注射到番茄的果實后SlSWEET11b基因的表達量明顯降低。以上結(jié)果表明構(gòu)建的過表達載體和沉默載體能夠影響SlSWEET11b基因的表達,可以用于進一步的番茄遺傳轉(zhuǎn)化分析。4.利用Micro-Tom番茄建立了穩(wěn)定的遺傳轉(zhuǎn)化體系,通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)將基因的沉默載體轉(zhuǎn)化番茄,已獲得SlSWEET11b沉默株系7株,通過PCR鑒定分析后獲得4株顯示陽性的番茄植株,可用于進一步的功能分析。
【學(xué)位授予單位】：沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：S641.2

【參考文獻】

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本文編號：1323526