發(fā)布時(shí)間：2017-12-23 10:28

  本文關(guān)鍵詞：番茄SlSWEET11b基因的表達(dá)及遺傳轉(zhuǎn)化　出處：《沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)》2017年碩士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

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【摘要】：SWEET蛋白是一種新型的糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白,在糖的輸出轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程中起重要作用,近來(lái)的研究表明SWEET蛋白在擬南芥、水稻中,在離子的轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程、生長(zhǎng)和發(fā)育、以及對(duì)環(huán)境的適應(yīng)性方面都起著重要作用。本課題組前期研究表明SlSWEETT11b基因在番茄果實(shí)中大量表達(dá),該基因在番茄果實(shí)發(fā)育的過(guò)程中所發(fā)揮的具體作用還不清楚。本研究通過(guò)生物信息學(xué)及實(shí)時(shí)定量PCR方法明確SlSWEE7116基因的特征,并通過(guò)構(gòu)建基因的過(guò)表達(dá)和沉默載體,采用瞬時(shí)表達(dá)和穩(wěn)定遺傳轉(zhuǎn)化的方法對(duì)SlSlSWEET11b基因的功能進(jìn)行初步分析,獲得的主要結(jié)果如下:1.根據(jù)番茄數(shù)據(jù)庫(kù)獲得SlSWWEET11b基因全長(zhǎng)1124bp,由375個(gè)氨基酸編碼,跨膜結(jié)構(gòu)分析表明該基因具有7跨膜結(jié)構(gòu),包含兩個(gè)MtN3結(jié)構(gòu)域。與擬南芥SWEET家族的系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)分析表明,該蛋白位于CladeⅡ。根據(jù)該分支其它SWEET蛋白的功能分析,該蛋白可能主要負(fù)責(zé)蔗糖和果糖的轉(zhuǎn)運(yùn)。2.采用實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù),對(duì)番茄果實(shí)的不同發(fā)育時(shí)期表達(dá)分析,結(jié)果表明SlSWEET11b基因在番茄花后21d表達(dá)量達(dá)到峰值,隨后下降。在果實(shí)成熟過(guò)程中,該基因的表達(dá)部位也不盡相同,其中在綠果期的膠質(zhì)胎座、轉(zhuǎn)色期的心室隔壁、紅果期的萼片與果實(shí)維管束中表達(dá)量較高。3.成功克隆到SlWEET11b基因的全長(zhǎng),采用雙酶切的方法進(jìn)行過(guò)表達(dá)載體的構(gòu)建,同時(shí)利用Gateway技術(shù)構(gòu)建沉默表達(dá)載體。利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的番茄果實(shí)注射方法將構(gòu)建好的過(guò)表達(dá)和沉默載體在番茄花后21d的果實(shí)中進(jìn)行瞬時(shí)表達(dá),qRT-PCR結(jié)果分析表明過(guò)表達(dá)載體注射番茄果實(shí)3d后SlSWEET11b基因表達(dá)量明顯高于對(duì)照果實(shí);同樣將構(gòu)建好的沉默載體注射到番茄的果實(shí)后SlSWEET11b基因的表達(dá)量明顯降低。以上結(jié)果表明構(gòu)建的過(guò)表達(dá)載體和沉默載體能夠影響SlSWEET11b基因的表達(dá),可以用于進(jìn)一步的番茄遺傳轉(zhuǎn)化分析。4.利用Micro-Tom番茄建立了穩(wěn)定的遺傳轉(zhuǎn)化體系,通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)將基因的沉默載體轉(zhuǎn)化番茄,已獲得SlSWEET11b沉默株系7株,通過(guò)PCR鑒定分析后獲得4株顯示陽(yáng)性的番茄植株,可用于進(jìn)一步的功能分析。
【學(xué)位授予單位】：沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：S641.2

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1323526