發(fā)布時(shí)間：2017-12-24 06:06

  本文關(guān)鍵詞：SRBSDV在水稻原生質(zhì)體內(nèi)的復(fù)制與表達(dá)　出處：《福建農(nóng)林大學(xué)》2015年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：南方水稻黑條矮縮病毒(Southern rice black-streaked dwarf virus, SRBSDV)由介體白背飛虱以持久增殖型傳播,該病毒已成為威脅我國水稻產(chǎn)量的重要的病毒之一。本文通過酶解法獲得有較高活性的水稻原生質(zhì)體,建立病毒侵染原生質(zhì)體系,將抗體與熒光素交聯(lián),利用抗體與抗原特異性結(jié)合原理,通過激光共聚焦顯微鏡觀察病毒在原生質(zhì)體內(nèi)的復(fù)制及表達(dá)。同時(shí)通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR以及Western blot檢測病毒相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄及其蛋白的表達(dá)動(dòng)態(tài)。首先通過Gateway系統(tǒng)進(jìn)行原核表達(dá),免疫兔子獲得SRBSDV結(jié)構(gòu)蛋白P10和非結(jié)構(gòu)蛋白P9-1的抗血清,間接ELISA測定其效價(jià)分別為6400倍和3200倍,Western blot檢測結(jié)果表明兩個(gè)抗體均可特異性檢測感病毒株。利用IC-RT-PCR和Dot-blot ELISA方法來檢驗(yàn)兩個(gè)抗體的靈敏度,兩者的檢測結(jié)果表現(xiàn)一致,說明SRBSDV的P9-1蛋白的抗體及P10蛋白的抗體具有較強(qiáng)的靈敏度。利用PEG介導(dǎo)SRBSDV病毒侵染原生質(zhì)體,培養(yǎng)48h后利用熒光素交聯(lián)的P9-1、P10抗體進(jìn)行孵育,共聚焦顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn),P10蛋白的表達(dá)量少于P9-1蛋白表達(dá)量。通過熒光定量PCR檢測結(jié)果顯示,SRBSDV的S5-1、S5-2、S6、S7-2、S9-1、S9-2基因在原生質(zhì)體內(nèi)36h左右表達(dá)達(dá)到高峰,S7-1以及S10基因在水稻原生質(zhì)體內(nèi)48h左右表達(dá)達(dá)到峰值。而通過Western blot檢測結(jié)果顯示,SRBSDV的P5-1、P6、P9-1蛋白在原生質(zhì)體內(nèi)48h左右表達(dá)達(dá)到高峰,P7-1及P10蛋白在原生質(zhì)體內(nèi)60h左右表達(dá)達(dá)到高峰。
【學(xué)位授予單位】：福建農(nóng)林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S435.111.4

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本文編號：1327153