發(fā)布時(shí)間：2020-12-08 17:29

　　磷對(duì)家禽生產(chǎn)至關(guān)重要,不僅能促進(jìn)骨骼的正常生長(zhǎng)發(fā)育,還能保證良好的蛋殼品質(zhì)。作為骨源性激素,成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子23（Fibroblast growth factor 23,FGF23）能夠抑制哺乳動(dòng)物腎臟中磷酸鹽的重吸收,促進(jìn)磷酸鹽的排出,是機(jī)體內(nèi)調(diào)控磷代謝的關(guān)鍵因子。因此研究FGF23如何調(diào)控家禽磷代謝及其骨骼發(fā)育,對(duì)深入了解FGF23作用機(jī)制以及生產(chǎn)實(shí)踐有重要意義。本論文研究了影響雞成骨細(xì)胞FGF23 mRNA表達(dá)的因素以及過表達(dá)FGF23腺病毒對(duì)成骨細(xì)胞礦化的影響,初步確定了FGF23在調(diào)控雞成骨細(xì)胞礦化的中的作用。1.調(diào)控雞成骨細(xì)胞FGF23表達(dá)的因素分析體外培養(yǎng)雞骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（Bone marrow stem cells,BMSCs）,并誘導(dǎo)其分化為成骨細(xì)胞。在誘導(dǎo)細(xì)胞分化的第8天,使用茜素紅S染色,可以觀察到大量紅色礦化結(jié)節(jié),表明大多BMSCs已經(jīng)被誘導(dǎo)分化為成骨細(xì)胞。為了探究影響成骨細(xì)胞FGF23表達(dá)的因素,使用β-甘油磷酸鈉（β-glycerol phosphate disodium salt,β-Gly,5mM、10M、20mM）、氯化鈣（Calcium chlo... 

【文章來源】： 呂正天 山東農(nóng)業(yè)大學(xué)

【文章頁(yè)數(shù)】：79 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

總RNA電泳圖

FGF23對(duì)雞成骨細(xì)胞礦化的作用及其分子機(jī)理20標(biāo)準(zhǔn)曲線：隨機(jī)取對(duì)照組、不同處理組的cDNA混合，制作5個(gè)濃度梯度（依次進(jìn)行5×倍比稀釋）：1×、5×、25×、125×、625×。按照上述PCR步驟進(jìn)行擴(kuò)增，得到管家基因和個(gè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線（本論文中管家基因?yàn)棣?actin，如圖2-3）。根據(jù)斜率（k）計(jì)算擴(kuò)增效率，計(jì)算公式為：擴(kuò)增效率e=101/(-k)-1。標(biāo)準(zhǔn)曲線中斜率k在-3至-3.5之間，RT-PCR的擴(kuò)增效率在0.9-1.1之間時(shí)，說明引物擴(kuò)增效果最佳。當(dāng)目的基因的擴(kuò)增效率和持家基因的擴(kuò)增效率相同時(shí)（即二者的斜率相差不超過0.2），以β-actin的表達(dá)水平作為內(nèi)參，采用“平均相對(duì)表達(dá)量=2-△△Ct”計(jì)算該基因的相對(duì)表達(dá)量。為了消除不同PCR板之間的差異，每個(gè)批次擴(kuò)增目的基因的同時(shí)都會(huì)添加管家基因，而且每個(gè)樣品作兩個(gè)重復(fù)，即每個(gè)樣品可得到兩個(gè)Ct值，取兩個(gè)Ct值計(jì)算平均值來作為該樣品的Ct值進(jìn)行分析統(tǒng)計(jì)。圖2-2Real-TimePCR反應(yīng)條件Fig2-2ThermalcyclerprotocolofReal-TimePCR圖2-3β-actin擴(kuò)增曲線Figure2-3Amplificationcurveofβ-actin

FGF23對(duì)雞成骨細(xì)胞礦化的作用及其分子機(jī)理20標(biāo)準(zhǔn)曲線：隨機(jī)取對(duì)照組、不同處理組的cDNA混合，制作5個(gè)濃度梯度（依次進(jìn)行5×倍比稀釋）：1×、5×、25×、125×、625×。按照上述PCR步驟進(jìn)行擴(kuò)增，得到管家基因和個(gè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線（本論文中管家基因?yàn)棣?actin，如圖2-3）。根據(jù)斜率（k）計(jì)算擴(kuò)增效率，計(jì)算公式為：擴(kuò)增效率e=101/(-k)-1。標(biāo)準(zhǔn)曲線中斜率k在-3至-3.5之間，RT-PCR的擴(kuò)增效率在0.9-1.1之間時(shí)，說明引物擴(kuò)增效果最佳。當(dāng)目的基因的擴(kuò)增效率和持家基因的擴(kuò)增效率相同時(shí)（即二者的斜率相差不超過0.2），以β-actin的表達(dá)水平作為內(nèi)參，采用“平均相對(duì)表達(dá)量=2-△△Ct”計(jì)算該基因的相對(duì)表達(dá)量。為了消除不同PCR板之間的差異，每個(gè)批次擴(kuò)增目的基因的同時(shí)都會(huì)添加管家基因，而且每個(gè)樣品作兩個(gè)重復(fù)，即每個(gè)樣品可得到兩個(gè)Ct值，取兩個(gè)Ct值計(jì)算平均值來作為該樣品的Ct值進(jìn)行分析統(tǒng)計(jì)。圖2-2Real-TimePCR反應(yīng)條件Fig2-2ThermalcyclerprotocolofReal-TimePCR圖2-3β-actin擴(kuò)增曲線Figure2-3Amplificationcurveofβ-actin

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]蛋雞缺磷癥的誘因、癥狀及治療措施[J]. 賈飛.  中國(guó)畜禽種業(yè). 2019(07)
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[3]家禽磷營(yíng)養(yǎng)研究進(jìn)展與應(yīng)用[J]. 韓進(jìn)誠(chéng),王玉玲,王家慶,施傳信,姚軍虎.  飼料工業(yè). 2009(15)
[4]植酸磷和植酸酶研究進(jìn)展[J]. 賀建華.  動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào). 2005(01)



本文編號(hào)：2905416