發(fā)布時(shí)間：2020-12-09 15:11

　　目的克隆表達(dá)及純化鮑曼不動(dòng)桿菌（Acinetobacter baumannii）普遍應(yīng)急蛋白A（Universal stress protein A,UspA）,并進(jìn)行生物學(xué)預(yù)測(cè)和分析。方法查詢鮑曼不動(dòng)桿菌UspA基因序列,設(shè)計(jì)特異性PCR引物,以提取的鮑曼不動(dòng)桿菌基因組DNA為模板,PCR擴(kuò)增UspA片段。回收目的片段,連接到質(zhì)粒pET28a,轉(zhuǎn)化大腸埃希菌,37℃培養(yǎng)后,進(jìn)行PCR擴(kuò)增并測(cè)序。將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入表達(dá)菌,加入IPTG誘導(dǎo)重組UspA蛋白表達(dá),并經(jīng)Ni²⁺親和層析純化。采用生物信息學(xué)軟件分析UspA蛋白的生物學(xué)特性。結(jié)果獲得全長(zhǎng)為444bp的鮑曼不動(dòng)桿菌UspA基因,且成功構(gòu)建了重組質(zhì)粒pET28a-UspA,得到純度較高的相對(duì)分子質(zhì)量17×10³的重組UspA蛋白。該蛋白為細(xì)菌的胞質(zhì)蛋白,其α-螺旋占51%,延伸鏈占27%,無(wú)規(guī)卷曲的含量占31%。由2個(gè)同源UspA蛋白分子構(gòu)成二聚體。結(jié)論成功克隆表達(dá)了鮑曼不動(dòng)桿菌UspA蛋白,該蛋白可能含B細(xì)胞表位,而具有免疫原性,為其生物學(xué)活性及耐藥機(jī)制研究提供了理論基礎(chǔ)。 

【文章來(lái)源】：中國(guó)病原生物學(xué)雜志. 2019年12期 第1365-1369頁(yè) 北大核心

【文章頁(yè)數(shù)】：5 頁(yè)

【部分圖文】：

PCR擴(kuò)增UspA基因

將重組質(zhì)粒pET28a-UspA轉(zhuǎn)化表達(dá)菌BL21后得到能夠表達(dá)重組UspA蛋白的重組菌。挑取單菌落到LB培養(yǎng)基中培養(yǎng)過(guò)夜，將其接種到新培養(yǎng)基后用IPTG誘導(dǎo)目的蛋白的表達(dá)，使用Ni 2+親和層析柱純化重組UspA蛋白，SDS-PAGE電泳分析蛋白分子質(zhì)量及純度，結(jié)果見(jiàn)圖2。該蛋白相對(duì)分子質(zhì)量約17×103，與理論值相符。柱層析后的蛋白為單一電泳條帶，純度較高。3 UspA蛋白的理化特性

生物信息學(xué)分析UspA蛋白共有147個(gè)氨基酸，總原子數(shù)為2 267，理論相對(duì)分子質(zhì)量為15.8×103，理論pI是5.59。UspA蛋白的不穩(wěn)定系數(shù)為33.3，<閾值40，推測(cè)為穩(wěn)定蛋白。該蛋白的平均親水性值是0.271，為非親水性蛋白。在線軟件Phobius預(yù)測(cè)UspA蛋白定位在細(xì)菌細(xì)胞質(zhì)，且無(wú)信號(hào)肽（圖3）。4 UspA蛋白的結(jié)構(gòu)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]血流感染泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌耐藥和基因型分析[J]. 姜麗,賈萌,高飛,呂品,李江,朱尊民.  中國(guó)病原生物學(xué)雜志. 2018(04)



本文編號(hào)：2907062