發(fā)布時間：2024-06-29 20:58

　　人類乙型肝炎病毒HBV可特異侵染人類肝組織,引起急性或慢性乙型肝炎,從而誘發(fā)肝硬化、肝癌。目前,世界范圍內約有20億HBV感染引起的肝炎患者,其中約有3.5億患者轉化為慢性乙型肝炎,而世界每年約有60萬乙肝患者死亡。我國作為發(fā)展中國家,同時也是乙型肝炎的高發(fā)區(qū),全國約有1億乙肝病毒攜帶者,而慢性乙型肝炎患者更是高達2000萬人。雖然,目前預防HBV感染的疫苗已相當成熟,但由于HBV侵染宿主的范圍狹窄,在選擇實驗動物開展相關研究時存在較大限制,導致目前對HBV的侵染機制知之甚少,特別是慢性乙型肝炎的發(fā)生機制,從而無法制定有效的治療策略。樹鼩作為靈長類的近親,由于其對HBV易感且具有個體小、易于飼養(yǎng)等優(yōu)點,現(xiàn)已成為HBV研究的理想動物模型。目前,針對樹鼩免疫系統(tǒng),特別是一些免疫細胞的標志研究較少,這嚴重阻礙了樹鼩作為一種理想的HBV感染動物模型的進一步應用。對樹鼩免疫系統(tǒng)的研究將有可能揭示HBV與宿主間的相互作用,有助于乙型肝炎的預防和治療。大量實驗證明調節(jié)性T淋巴細胞(Treg)與各類癌癥的發(fā)生有著密切的關系,而樹鼩Treg細胞的相關標志分子的編碼序列卻未有報道。因此,本實驗以獲得樹鼩T...

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
第一章 文獻綜述
    1.1 乙型肝炎病毒及其研究現(xiàn)狀
        1.1.1 乙型肝炎病毒基本特征
        1.1.2 黑猩猩乙型肝炎動物模型
        1.1.3 HBV轉基因小鼠動物模型
        1.1.4 HBV類似病毒的研究
        1.1.5 樹鼩相關背景介紹
    1.2 調節(jié)性T淋巴細胞—Treg概述
        1.2.1 CD4\CD127的背景概述
第二章 引言
    2.1 研究目的及意義
    2.2 研究范圍和內容
第三章 樹鼩CD4/CD127基因的克隆及分子特征分析
    3.1 材料
        3.1.1 實驗動物及動物組織來源
        3.1.2 菌種與質粒
        3.1.3 主要試劑
        3.1.4 儀器耗材
        3.1.5 試劑配制
    3.2 方法
        3.2.1 血液總RNA的提取
        3.2.2 樹鼩CD4、CD127全長編碼序列的特異性引物設計
        3.2.3 RT-PCR擴增目的基因
        3.2.4 DH5α感受態(tài)細胞的制備
        3.2.5 T/A克隆
        3.2.6 質粒小提及酶切鑒定
        3.2.7 測序及序列分析
    3.3 結果與分析
        3.3.1 樹鼩CD4、CD127全長編碼序列的擴增
        3.3.2 樹鼩CD4、CD127核酸序列分析
        3.3.3 樹鼩CD4、CD127的氨基酸序列分析結果
        3.3.4 樹鼩CD4、CD127蛋白三維空間結構建模分析
    3.4 討論
        3.4.1 樹鼩CD4、CD127擴增
        3.4.2 樹鼩CD4、CD127氨基酸及蛋白空間結構分析
第四章 樹鼩CD4慢病毒真核表達載體的構建及表達
    4.1 材料
        4.1.1 菌種與質粒
        4.1.2 細胞
        4.1.3 主要試劑
        4.1.4 試劑配制
        4.1.5 儀器耗材
    4.2 方法
        4.2.1 慢病毒真核表達載體的重組構建
        4.2.2 細胞轉染用高純度質粒的提取
        4.2.3 真核慢病毒表達載體轉染與感染
    4.3 結果與分析
        4.3.1 樹鼩CD4慢病毒載體的重組構建
        4.3.2 樹鼩CD4重組慢病毒載體的真核表達
    4.4 討論
第五章 總結與展望
    5.1 總結
    5.2 展望
參考文獻
在校期間發(fā)表論文
致謝



本文編號：3997880