發(fā)布時(shí)間：2025-01-17 14:38

　　 目的建立基于中和表位的GⅡ. 4型重組諾如病毒(Norovirus,NoV)VP1蛋白病毒樣顆粒(virus-like particle,VLP)抗原含量檢測(cè)方法,并進(jìn)行驗(yàn)證,以用于重組NoV疫苗質(zhì)量控制。方法應(yīng)用ELISA和HBGA-VLP阻斷試驗(yàn)篩選中和性單克隆抗體,并篩選配對(duì)抗體,分別作為包被抗體和檢測(cè)抗體,建立GⅡ. 4型重組NoV VP1蛋白VLP雙抗夾心ELISA抗原定量檢測(cè)方法。確定方法的線性檢測(cè)范圍,并對(duì)方法的專屬性、準(zhǔn)確性和精密性進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果27株GⅡ. 4 VLP特異性ELISA檢測(cè)陽(yáng)性的雜交瘤細(xì)胞克隆中,有12株GⅡ. 4型阻斷抗體檢測(cè)呈陽(yáng)性,選擇具有GⅡ. 4型阻斷活性的特異性單抗2H7-C5和2E6-B3作為雙抗夾心抗體對(duì),用于建立GⅡ. 4型重組NoV VP1蛋白VLP雙抗夾心ELISA抗原定量檢測(cè)方法。該方法的線性測(cè)定范圍為15. 63～250 ng/mL,標(biāo)準(zhǔn)曲線R2均> 0. 98;準(zhǔn)確性驗(yàn)證的加標(biāo)回收率在72. 23%～134. 03%之間;重復(fù)性驗(yàn)證的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(relative standard deviation,RSD)為7. 06...

【文章頁(yè)數(shù)】：6 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 病毒及細(xì)胞
    1.2 主要試劑及儀器
    1.3 中和性單抗的篩選
        1.3.1 VLP特異性ELISA
        1.3.2 HBGA-VLP阻斷試驗(yàn)
    1.4 中和性單抗配對(duì)抗體的篩選
    1.5 檢測(cè)方法的建立
    1.6 線性及測(cè)定范圍的確定
    1.7 方法的驗(yàn)證
        1.7.1 專屬性
        1.7.2 準(zhǔn)確性
        1.7.3 精密性
            1.7.3. 1 重復(fù)性
            1.7.3. 2 中間精密性
2 結(jié)果
    2.1 中和性單抗的篩選
    2.2 中和性單抗配對(duì)抗體的篩選
    2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性及測(cè)定范圍
    2.4 方法的驗(yàn)證
        2.4.1 專屬性
        2.4.2 準(zhǔn)確性
        2.4.3 精密性
            2.4.3. 1 重復(fù)性
            2.4.3. 2 中間精密性
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