發(fā)布時(shí)間：2025-03-18 22:42

　　目的:急性肝衰竭（ALF）可由多種原因引起的一種綜合征,表現(xiàn)為大量肝細(xì)胞壞死及（或）嚴(yán)重肝功能障礙,短期內(nèi)患者可發(fā)生肝性腦病。ALF是嚴(yán)重危害人類(lèi)健康的疾病。肝性腦病（HE）是ALF晚期最常見(jiàn)的致死性并發(fā)癥,其發(fā)病機(jī)制迄今尚未完全闡明,目前已提出多種學(xué)說(shuō)。其中高血氨被認(rèn)為是最關(guān)鍵的因素之一。氨是一種弱堿,在生理性pH 7.4時(shí),氨發(fā)生質(zhì)子化,98%以上以NH₄⁺的形式存在。游離的NH₃是脂溶性的,可以被動(dòng)通過(guò)細(xì)胞膜。近年研究發(fā)現(xiàn),氨的轉(zhuǎn)運(yùn),除了伴隨著濃度梯度的被動(dòng)擴(kuò)散之外,還有NH₄⁺/NH₃的主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白參與其中。哺乳動(dòng)物中的氨轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白,即Rhesus相關(guān)糖蛋白是近年來(lái)研究較多的氨轉(zhuǎn)運(yùn)體,尤其RhBG/Rhbg和RhCG/Rhcg在腎臟氨分泌中的作用已通過(guò)基因敲除等實(shí)驗(yàn)得出初步結(jié)論。而ALF導(dǎo)致的HE中,尚不清楚腦組織中是否存在NH₄⁺/NH₃的主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白。本研究通過(guò)建立ALF所致肝性腦病...

【文章頁(yè)數(shù)】：78 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語(yǔ)
第一部分：急性肝衰竭肝性腦病模型中腦組織氨轉(zhuǎn)運(yùn)體的表達(dá)
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 材料
            2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
            2.1.2 實(shí)驗(yàn)藥物
            2.1.3 主要試劑配制
            2.1.4 主要實(shí)驗(yàn)器材
        2.2 動(dòng)物分組及模型制備
        2.3 血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(alanine aminotransferase, ALT)檢測(cè)
        2.4 肝組織病理學(xué)檢查
        2.5 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物不同時(shí)間點(diǎn)血氨及腦實(shí)質(zhì)氨水平檢測(cè)
            2.5.1 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線
            2.5.2 樣本準(zhǔn)備
            2.5.3 加入反應(yīng)混合物
            2.5.4 測(cè)量
        2.6 應(yīng)用Western blot方法觀察腦組織氨轉(zhuǎn)運(yùn)體蛋白的表達(dá)
            2.6.1 腦組織總蛋白提取
            2.6.2 BCA法測(cè)腦組織蛋白濃度
            2.6.3 Western blot方法檢測(cè)腦組織氨轉(zhuǎn)運(yùn)體蛋白的表達(dá)
        2.7 逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（reverse transcription PCR，RT-PCR）檢測(cè)腦組織Rhbg、Rhcg基因m RNA的相對(duì)含量
            2.7.1 腦組織RNA的提取
            2.7.2 逆轉(zhuǎn)錄合成c DNA
            2.7.3 PCR（三步法）
            2.7.4 瓊脂糖凝膠電泳：
        2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
    3 結(jié)果
        3.1 各組動(dòng)物給藥后反應(yīng)及死亡情況
        3.2 血清ALT水平
        3.3 肝臟HE染色結(jié)果
        3.4 各組不同時(shí)間點(diǎn)小鼠血氨及腦組織氨水平測(cè)定
        3.5 腦組織氨轉(zhuǎn)運(yùn)體蛋白表達(dá)情況
        3.6 腦組織氨轉(zhuǎn)運(yùn)體m RNA表達(dá)變化
    4 討論
    5 結(jié)論
第二部分：腫瘤壞死因子-α對(duì)腦組織氨轉(zhuǎn)運(yùn)體表達(dá)的影響
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 材料
            2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與細(xì)胞
            2.1.2 實(shí)驗(yàn)藥物
            2.1.3 主要試劑配制
            2.1.4 主要實(shí)驗(yàn)器材
        2.2 動(dòng)物分組及模型制備
        2.3 血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(alanine aminotransferase, ALT)檢測(cè)
        2.4 血清腫瘤壞死因子-α ( TNF-α )水平測(cè)定
        2.5 肝組織病理學(xué)檢查
        2.6 血氨及腦組織氨水平檢測(cè)
            2.6.1 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線
            2.6.2 樣本準(zhǔn)備
            2.6.3 加入反應(yīng)混合物
            2.6.4 測(cè)量
        2.7 TNF-α對(duì)人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞中氨轉(zhuǎn)運(yùn)體表達(dá)的影響
        2.8 Western blot方法分析腦組織或HBMEC中氨轉(zhuǎn)運(yùn)體蛋白的相對(duì)表達(dá)
            2.8.1 腦組織或HBMEC總蛋白提取
            2.8.2 BCA法測(cè)蛋白濃度
            2.8.3 Western blot方法檢測(cè)腦組織或HBMEC中氨轉(zhuǎn)運(yùn)體蛋白相對(duì)表達(dá)
        2.9 逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（reverse transcription PCR，RT-PCR）檢測(cè)腦組織及HBMEC中Rhbg/Rh BG、Rhcg/Rh CG mRNA的相對(duì)含量
            2.9.1 腦組織或HBMEC中總RNA的提取
            2.9.2 逆轉(zhuǎn)錄合成c DNA
            2.9.3 PCR（三步法）
            2.9.4 瓊脂糖凝膠電泳
        2.10 免疫組化( Immunohistochemistry, IHC )及免疫熒光法(Immunofluorescent assays, IFA)觀察Rhcg蛋白在小鼠腦組織中的表達(dá)部位
        2.11 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
    3 結(jié)果
        3.1 各組動(dòng)物給藥后反應(yīng)及死亡率情況
        3.2 血清ALT水平
        3.3 D-Gal N聯(lián)合LPS組及對(duì)照組血清TNF-α水平
        3.4 肝臟HE染色結(jié)果
        3.5 血氨及腦組織氨水平
        3.6 腦組織氨轉(zhuǎn)運(yùn)體蛋白表達(dá)情況
        3.7 腦組織或HBMEC中氨轉(zhuǎn)運(yùn)體m RNA相對(duì)表達(dá)
        3.8 腦組織中氨轉(zhuǎn)運(yùn)體Rhcg的表達(dá)部位
    4 討論
    5 結(jié)論
本研究創(chuàng)新性的自我評(píng)價(jià)
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)介



本文編號(hào)：4036285