發(fā)布時間：2021-01-16 16:55

　　目的研究PHD2基因在前列腺癌PC3細胞血管生成擬態(tài)形成及細胞增殖、遷移、侵襲中的作用方法1.前列腺癌PC3細胞株體外培養(yǎng),設(shè)計4條PHD2shRNA序列,包裝后轉(zhuǎn)染PC3細胞,利用Western Blot及RT-PCR檢測沉默效率,選出沉默效果最好的shRNA為實驗組。2.實驗分為PC3組、PC3+shRNA-NC組和PC3+PHD2shRNA組,利用Western Blot法檢測轉(zhuǎn)染后各組PC-3細胞中PHD2及HIF-1α、EphA2蛋白表達變化情況。3.各組細胞進行體外三維培養(yǎng),顯微鏡下觀察各組PC3細胞中血管生成擬態(tài)形成數(shù)目的變化情況。4.利用MTT增殖實驗、細胞劃痕實驗、Transwell侵襲實驗,檢測各組PC3細胞增殖、遷移、侵襲能力的變化情況。結(jié)果1.Western Blot及RT-PCR實驗結(jié)果顯示:四組shRNA質(zhì)粒轉(zhuǎn)染前列腺癌PC3細胞后,PC3細胞中PHD2 mRNA表達水平及蛋白表達水平均明顯下降,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。獲得實驗組PHD2shRNA,沉默效率達80%以上。2.Western Blot實驗結(jié)果顯示:轉(zhuǎn)染48h后,較空白組及陰性... 

【文章來源】：南華大學(xué)湖南省

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

pGPU6/GFP/Neo表達質(zhì)粒圖譜

4.2 Real time-PCR 實驗檢測結(jié)果4.2.1 實驗分組NO 樣本編號 NO 樣本編號1 A、PC3 4 D、shRNA 質(zhì)粒 22 B、NC 5 E、shRNA 質(zhì)粒 33 C、shRNA 質(zhì)粒 1 6 F、shRNA 質(zhì)粒 44.2.2 擴增曲線：結(jié)果描述及分析：結(jié)果顯示PHD2的擴增曲線具有正常擴增曲線的4個特征，而陰性對照組（水）無明顯熒光信號顯示，提示 RT-PCR 程序運作正常，PHD2基因得到有效擴增。（見圖 4.2、圖 4.3）

4.2.2 擴增曲線：結(jié)果描述及分析：結(jié)果顯示PHD2的擴增曲線具有正常擴增曲線的4個特征，而陰性對照組（水）無明顯熒光信號顯示，提示 RT-PCR 程序運作正常，PHD2基因得到有效擴增。（見圖 4.2、圖 4.3）圖 4.2 PHD2 的擴增曲線

【參考文獻】：
期刊論文
[1]前列腺癌組織中血管生成擬態(tài)形成的分子通路研究進展[J]. 李俊君,常德貴,董良,陽方,俞旭君.  中國性科學(xué). 2017(05)
[2]沉默Epha2對前列腺癌PC3細胞生物學(xué)性狀與血管生成擬態(tài)的影響[J]. 曹陽,李清.  實用癌癥雜志. 2016(04)
[3]低氧應(yīng)激因子PHD2與血管新生相關(guān)疾病[J]. 賈慧珍,KASIM Vivi,徐志玲,楊力,吳壽榮.  藥學(xué)學(xué)報. 2014(02)



本文編號：2981186