發(fā)布時(shí)間：2020-12-10 03:31

　　目的:本課題擬通過(guò)體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)研究雌激素和氧化應(yīng)激對(duì)小鼠成骨細(xì)胞凋亡、增殖和分化等生物學(xué)行為的影響,以及在此過(guò)程中過(guò)氧化物還原酶1型表達(dá)的情況;另外通過(guò)對(duì)小鼠MC3T3-E1前成骨細(xì)胞系進(jìn)行過(guò)氧化物還原酶1型基因的敲除和過(guò)表達(dá),研究該蛋白對(duì)成骨細(xì)胞凋亡、增殖和分化等生物學(xué)行為的影響;并對(duì)雌激素影響成骨細(xì)胞過(guò)氧化物還原酶1型表達(dá)的相關(guān)的信號(hào)通路進(jìn)行研究,進(jìn)一步探討雌激素和氧化應(yīng)激調(diào)控成骨細(xì)胞功能的具體作用機(jī)制。方法:1.本研究擬通過(guò)使用8周齡雌性小鼠,對(duì)其進(jìn)行卵巢摘除（OVX）手術(shù),制備雌激素缺乏骨質(zhì)疏松動(dòng)物模型。通過(guò)對(duì)小鼠脛骨石蠟切片進(jìn)行組織化學(xué)染色和免疫組織化學(xué)染色等方法,觀察雌激素缺乏后骨組織的病理學(xué)變化以及過(guò)氧化物還原酶的表達(dá)情況。另外采用體外培養(yǎng)的小鼠MC3T3-E1前成骨細(xì)胞系對(duì)體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證。2.通過(guò)體外培養(yǎng)的小鼠MC3T3-E1前成骨細(xì)胞系,采用CCK8,堿性磷酸酶半定量測(cè)試,茜素紅S染色,天狼星紅染色,流式細(xì)胞技術(shù),實(shí)時(shí)熒光定量PCR和Western-blot蛋白電泳等方法,檢測(cè)氧化應(yīng)激對(duì)體外培養(yǎng)的MC3T3-E1細(xì)胞的凋亡、增殖和分化的影響,以及雌激素對(duì)此過(guò)程... 

【文章來(lái)源】：山東大學(xué)山東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：170 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
英文縮略語(yǔ)表
第1章 前言
第2章 雌激素和氧化應(yīng)激對(duì)成骨細(xì)胞功能以及過(guò)氧化物還原酶1型表達(dá)的影響
    2.1 材料和方法
        2.1.1 主要試劑和儀器
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)方法
    2.2 結(jié)果
        2.2.1 雌激素缺乏導(dǎo)致小鼠脛骨近端骨小梁表現(xiàn)為骨質(zhì)疏松
        2.2.2 雌激素缺乏導(dǎo)致小鼠脛骨近端骨小梁骨改建活躍
        2.2.3 雌激素缺乏導(dǎo)致小鼠脛骨近端過(guò)氧化物還原酶表達(dá)增加
        2.2.4 小鼠MC3T3-E1前成骨細(xì)胞系的體外培養(yǎng)的形態(tài)及功能鑒定
        2.2.5 氧化應(yīng)激導(dǎo)致成骨細(xì)胞凋亡增加并降低細(xì)胞活力
        2.2.6 雌激素抑制氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的成骨細(xì)胞凋亡和PRX1表達(dá)的增加
        2.2.7 氧化應(yīng)激導(dǎo)致成骨細(xì)胞的分化功能降低以及雌激素的保護(hù)作用
    2.3 討論
        2.3.1 雌激素缺乏導(dǎo)致高轉(zhuǎn)化型骨質(zhì)疏松
        2.3.2 雌激素缺乏導(dǎo)致小鼠脛骨成骨細(xì)胞內(nèi)PRXs表達(dá)水平升高
        2.3.3 ROS促進(jìn)成骨細(xì)胞PRX1表達(dá)和凋亡并抑制分化
        2.3.4 雌激素通過(guò)降低PRX1表達(dá)抑制ROS誘導(dǎo)的成骨細(xì)胞凋亡并促進(jìn)分化
    2.4 結(jié)論
第3章 過(guò)氧化物還原酶1型敲除和過(guò)表達(dá)細(xì)胞系的制備
    3.1 材料和方法
        3.1.1 主要試劑和儀器
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)方法
    3.2 結(jié)果
        3.2.1 MC3T3-E1細(xì)胞電轉(zhuǎn)條件檢測(cè)結(jié)果
        3.2.2 MC3T3-E1細(xì)胞藥篩濃度檢測(cè)及單克隆生長(zhǎng)驗(yàn)證結(jié)果
        3.2.3 敲除靶位點(diǎn)設(shè)計(jì)及引物合成
        3.2.3 PRX1敲除載體構(gòu)建結(jié)果
        3.2.4 質(zhì)粒電轉(zhuǎn)后pool細(xì)胞的敲除效率檢測(cè)結(jié)果
        3.2.5 CRISPR/Cas9敲除結(jié)果分析
        3.2.6 PRX1過(guò)表達(dá)載體構(gòu)建結(jié)果
        3.2.7 PRX1敲除和過(guò)表達(dá)AMC3T3-E1細(xì)胞株P(guān)RX1表達(dá)檢測(cè)
    3.3 討論
    3.4 結(jié)論
第4章 過(guò)氧化物還原酶1型對(duì)成骨細(xì)胞凋亡、增殖和分化功能的影響
    4.1 材料和方法
        4.1.1 主要試劑和儀器
        4.1.2 實(shí)驗(yàn)方法
    4.2 結(jié)果
        4.2.1 PRX1維持成骨細(xì)胞的增殖并促進(jìn)其凋亡
        4.2.2 雌激素抑制過(guò)氧化氫誘導(dǎo)的成骨細(xì)胞凋亡
        4.2.3 PRX1抑制成骨細(xì)胞的分化功能
        4.2.4 雌激素逆轉(zhuǎn)過(guò)氧化氫誘導(dǎo)的成骨細(xì)胞分化功能障礙
    4.3 討論
        4.3.1 PRX1抑制成骨細(xì)胞ROS水平并促進(jìn)其凋亡
        4.3.2 PRX1抑制成骨細(xì)胞分化功能
    4.4 結(jié)論
第5章 雌激素和氧化應(yīng)激通過(guò)過(guò)氧化物還原酶1型影響成骨細(xì)胞功能的信號(hào)通路研究
    5.1 材料和方法
        5.1.1 主要試劑和儀器
        5.1.2 實(shí)驗(yàn)方法
    5.2 結(jié)果
        5.2.1 PRX1參與TRX、MAPK、AKT1、NF-κB信號(hào)通路的調(diào)節(jié)
        5.2.2 PRX1通過(guò)細(xì)胞色素C調(diào)節(jié)成骨細(xì)胞凋亡
        5.2.3 PRX1通過(guò)硫氧還蛋白促進(jìn)細(xì)胞凋亡信號(hào)調(diào)節(jié)激酶1活化
        5.2.4 雌激素和氧化應(yīng)激通過(guò)PRX1-AKT1/NF-κB信號(hào)通路影響成骨細(xì)胞分化功能
    5.3 討論
        5.3.1 PRX1分別通過(guò)Cyto-c和ASK1途徑影響成骨細(xì)胞凋亡
        5.3.2 雌激素在氧化應(yīng)激環(huán)境下通過(guò)AKT1/PRX1/NF-κB途徑調(diào)控成骨細(xì)胞增殖和分化
    5.4 結(jié)論
第6章 全文結(jié)論
圖片附錄
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
學(xué)位論文評(píng)閱及答辯情況表
附錄


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]過(guò)氧化氫預(yù)處理對(duì)抗氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞凋亡(英文)[J]. 唐小卿,陳靜,唐二虎,馮鑒強(qiáng),陳培熹.  生理學(xué)報(bào). 2005(02)



本文編號(hào)：2908008