發(fā)布時(shí)間：2020-11-03 07:03

　　 神經(jīng)細(xì)胞的生長(zhǎng)在神經(jīng)修復(fù)中發(fā)揮重要作用。采用生物相容性和生物可降解性好的材料,并在其表面修飾特定生物分子,從而在材料表面創(chuàng)造神經(jīng)細(xì)胞生長(zhǎng)的生理環(huán)境,成為調(diào)控神經(jīng)細(xì)胞行為和促進(jìn)神經(jīng)修復(fù)的重要手段。目前,在生物材料表面固定生物分子的常用方法主要為物理吸附法、化學(xué)接枝法和載體系統(tǒng)法,其中載體系統(tǒng)法在固定生物分子時(shí)能顯著改善物理吸附率低、易擴(kuò)散和化學(xué)接枝繁瑣的局限性,成為開(kāi)發(fā)簡(jiǎn)單有效的固定化的重要策略。磷灰石是一種天然存在的無(wú)機(jī)材料,具有優(yōu)異的生物相容性和良好的生物可降解性,且對(duì)大量分子具有親和力,廣泛用于生物醫(yī)藥載體系統(tǒng)研究。本課題運(yùn)用仿生礦化法,在鈦表面磷灰石(apatite)涂層上固定層粘連蛋白(Laminin,LN),構(gòu)建apatite/LN功能性涂層;對(duì)涂層的理化性能和緩釋性能進(jìn)行了研究;探究功能性涂層對(duì)神經(jīng)細(xì)胞PC12和神經(jīng)干細(xì)胞(Neural Stem Cells,NSCs)的生物學(xué)行為調(diào)控作用。本文的研究結(jié)果如下:(1)通過(guò)仿生礦化法制備出多孔均一的apatite涂層,并且運(yùn)用仿生共沉積法可以在其表面固定LN分子,形成apatite/LN涂層。場(chǎng)發(fā)射掃描電子顯微鏡(FE-SEM)結(jié)果表明,在形成apatite涂層的過(guò)程中,隨著反應(yīng)時(shí)間的延長(zhǎng),鈦表面逐漸形成片層狀結(jié)構(gòu),且片層的大小逐漸增大,反應(yīng)至24 h后的片層大小為8.16±0.87μm,而apatite/LN涂層的片層大小則為9.79±0.69μm。(2)通過(guò)能譜(EDS)和X射線(xiàn)光電子能譜(XPS)對(duì)涂層中N元素的檢測(cè)以及傅立葉變換衰減全反射紅外光譜(ATR-FTIR)對(duì)酰胺基團(tuán)的檢測(cè)分析,并通過(guò)蛋白定量檢測(cè)可知,當(dāng)?shù)鞍自�始濃度分別為5μg/mL、10μg/m L、20μg/mL和40μg/mL時(shí),apatite/LN涂層中的平均蛋白含量約為1.31μg、3.90μg、4.20μg和4.55μg。結(jié)果表明,仿生礦化能在apatite涂層上迅速有效地共沉積LN分子。(3)通過(guò)對(duì)apatite/LN涂層的理化性能的檢測(cè),發(fā)現(xiàn)apatite/LN涂層的厚度(9.57±0.40μm)比單純的apatite涂層(8.79±0.22μm)稍厚。apatite涂層和apatite/LN涂層與基底的結(jié)合強(qiáng)度分別約為10.11 MPa和11.06 MPa。此外,apatite涂層的水接觸角約為80°,而apatite/LN涂層的水接觸角則減小到56°左右,即其表面的親水性質(zhì)得到有效的改善。(4)apatite/LN涂層置于磷酸鹽緩沖液(PBS)中的體外降解結(jié)果表明,降解28 d后,涂層的片狀微晶結(jié)構(gòu)部分松垮無(wú)規(guī)則;降解90 d后,其片狀結(jié)構(gòu)幾乎完全脫落。同時(shí)apatite/LN涂層中LN分子的體外釋放結(jié)果表明,LN基本保持了相對(duì)較為緩慢的釋放率,在體外可以進(jìn)行持續(xù)可控的釋放,直到釋放實(shí)驗(yàn)至28 d,其釋放量?jī)H達(dá)到20.72%左右。(5)通過(guò)神經(jīng)細(xì)胞PC12與NSCs的體外培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)表明,apatite/LN涂層的生物相容性比較優(yōu)異,且仿生共沉積的LN分子能夠顯著提高神經(jīng)細(xì)胞和NSCs的粘附和鋪展能力,并能夠有效的促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞和NSCs的增殖和突觸形成,同時(shí)對(duì)NSCs向神經(jīng)元方向分化有一定的促進(jìn)作用。
【學(xué)位單位】：浙江理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類(lèi)】：R318.08
【部分圖文】：

圖 1.1 瓦氏變性后的神經(jīng)自主修復(fù)示意圖[3]1.2 神經(jīng)組織工程外周神經(jīng)損傷導(dǎo)致神經(jīng)缺損時(shí)，需要在神經(jīng)殘端之間插入移植物來(lái)連接間隙并支持軸突再生[5]。植入自體神經(jīng)，目前被視為周?chē)�神�?jīng)缺損修復(fù)黃金標(biāo)準(zhǔn)[6]。

圖 1.2 層粘連蛋白（Laminnin, LN）的結(jié)構(gòu)示意圖的結(jié)構(gòu)域與細(xì)胞受體相互作用從而調(diào)控細(xì)胞行為[55, 56]。L，在神經(jīng)系統(tǒng)中的主要功能是刺激神經(jīng)突生長(zhǎng)[58]，且刺激影響施旺細(xì)胞的增殖和遷移[60]。眾所周知，受損區(qū)域遠(yuǎn)端

圖 2.1 apatite/LN 涂層制備圖2.4 材料的表征與測(cè)試2.4.1 場(chǎng)發(fā)射掃描電子顯微鏡（FE-SEM）將經(jīng)過(guò) 3、6、9、12、15、24 h 的制備時(shí)間得到的 apatite 涂層和 apatite/LN
【參考文獻(xiàn)】

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1 鄒穎;王文梅;朱雅男;楊衛(wèi)東;;CCK-8法評(píng)價(jià)口腔粘結(jié)材料的體外細(xì)胞毒性研究[J];口腔醫(yī)學(xué)研究;2011年08期

2 李民;曾琳;劉媛;龍?jiān)谠?李書(shū)林;伍亞民;;原漿型星形膠質(zhì)細(xì)胞調(diào)控神經(jīng)干細(xì)胞定向分化的優(yōu)化比例篩選[J];創(chuàng)傷外科雜志;2008年01期

本文編號(hào)：2868257