發(fā)布時間：2018-12-14 02:44

【摘要】：目的觀察mi R-155對SOCS1 m RNA及蛋白水平的影響,探究mi R-155對HBs Ag、HBe Ag表達的抑制作用。方法從Hep G2.2.15細胞中提取基因組,經(jīng)PCR擴增得到mi R-155前體序列,純化并連接入pm R-m Cherry載體,構(gòu)建重組質(zhì)粒pmi R-155,經(jīng)去內(nèi)毒素后轉(zhuǎn)染至Hep G2.2.15細胞。將細胞分為重組組(轉(zhuǎn)染pmi R-155質(zhì)粒)、空載組(轉(zhuǎn)染pm Rm Cherry質(zhì)粒)、轉(zhuǎn)染試劑組、空白組。采用熒光實時定量PCR檢測各組細胞內(nèi)mi R-155的表達,RT-PCR檢測各組細胞SOCS1 m RNA的表達,Western blotting檢測各組細胞SOCS1 蛋白的表達,ELISA檢測各組細胞HBs Ag、HBe Ag的表達。結(jié)果熒光實時定量PCR結(jié)果顯示,以空白組細胞內(nèi)mi R-155的表達量為基準,重組組mi R-155表達量(519.43±52.10)明顯高于空載組(24.24±16.70)及轉(zhuǎn)染試劑組(35.04±26.09,P0.05);RT-PCR結(jié)果顯示,重組組SOCS1 m RNA表達量(0.63±0.91)顯著低于空白組(P0.05);Western blotting結(jié)果顯示,重組組SOCS1蛋白表達量顯著低于空白組。以空白組的表達量為基準,重組組HBs Ag和HBe Ag蛋白表達的抑制率分別為55.62%±3.77%和47.87%±2.46%(P0.01)。結(jié)論過表達的mi R-155可抑制細胞內(nèi)SOCS1和HBV蛋白的表達。
[Abstract]:Objective to observe the effect of mi R-155 on the level of SOCS1 m RNA and protein, and to explore the inhibitory effect of mi R-155 on the expression of HBs Ag,HBe Ag. Methods the genome was extracted from Hep G2.2.15 cells, and the mi R-155 precursor sequence was amplified by PCR, then purified and ligated into pm R-m Cherry vector. The recombinant plasmid pmi R-155 was constructed and transfected into Hep G2.2.15 cells after endotoxin removal. The cells were divided into recombinant group (transfected with pmi R-155 plasmid), no-load group (transfected with pm Rm Cherry plasmid), transfection reagent group and blank group. Fluorescence real-time quantitative PCR was used to detect the expression of mi R-155, RT-PCR to detect the expression of SOCS1 m RNA, Western blotting to detect the expression of SOCS1 protein in each group, and ELISA to detect the expression of HBs Ag,HBe Ag in each group. Results the results of real-time fluorescence quantitative PCR showed that the expression of mi R-155 was significantly higher in the recombinant group (519.43 鹵52.10) than in the no-load group (24.24 鹵16.70) and the transfection reagent group (35.04 鹵26.09). P0.05); RT-PCR results showed that the expression of SOCS1 m RNA in the recombinant group (0.63 鹵0.91) was significantly lower than that in the control group (P0.05); Western blotting). The expression of SOCS1 protein in the recombinant group was significantly lower than that in the blank group. The inhibition rates of HBs Ag and HBe Ag protein expression in the recombinant group were 55.62% 鹵3.77% and 47.87% 鹵2.46% respectively (P0.01). Conclusion overexpression of mi R-155 can inhibit the expression of SOCS1 and HBV proteins.
【作者單位】： 廣州軍區(qū)廣州總醫(yī)院兒科;
【基金】：廣州市科技計劃項目(2013J4100116)~~
【分類號】：R512.62

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本文編號：2377762