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自身免疫性肝炎患者腸屏障功能及肝臟巨噬細(xì)胞極化分型的研究

發(fā)布時間:2018-12-17 11:20
【摘要】:目的:本研究首先比較自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis,AIH)患者、AIH肝硬化患者及健康對照者口服乳果糖(lactulose,L)和甘露醇(mannitol,M)雙糖分子探針后尿液中二者的回收情況以評價各組腸屏障功能,旨在探索腸屏障功能改變、腸道來源的抗原如脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)在AIH發(fā)生發(fā)展中的作用。另外,我們分析了AIH患者肝組織巨噬細(xì)胞極化分型分子的表達(dá),旨在初步探討并揭示AIH患者肝組織中巨噬細(xì)胞的功能表型。方法:第一部分:AIH患者腸屏障功能評價收集2015年1月-2016年1月于天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院消化科就診的AIH患者5例和對照AIH肝硬化患者5例、健康對照者10例。收集各組受試者口服測試液之后6小時以內(nèi)的所有尿液,利用高效液相色譜法(high performance liquid chromatography,HPLC)測定尿液中乳果糖和甘露醇的回收情況,計(jì)算尿液乳果糖/甘露醇比值也即L/M值以評價腸屏障功能。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會審核準(zhǔn)許(IRB2015-YX-002),所有患者均知情同意。第二部分:AIH患者肝臟巨噬細(xì)胞極化分型評價收集2015年1月-2016年1月于天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院消化科就診的AIH患者5例和對照肝病患者6例、肝囊腫患者5例,行超聲引導(dǎo)下肝穿刺活檢術(shù)取得長約1.5cm的肝組織條。應(yīng)用免疫組化法、免疫熒光染色法檢測各組肝病患者肝組織中巨噬細(xì)胞的活化和極化分型情況。進(jìn)一步通過RT-PCR法檢測并驗(yàn)證肝組織中巨噬細(xì)胞的極化分型相關(guān)表面標(biāo)志物和細(xì)胞因子。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會審核準(zhǔn)許(IRB2015-YX-002),所有患者均知情同意。結(jié)果:第一部分:AIH患者腸屏障功能評價(1)參與尿樣收集的5名AIH患者、5名AIH肝硬化患者在口服測試液后耐受良好、過程順利,無一人出現(xiàn)不良反應(yīng)。10名健康對照者中1名(10%)出現(xiàn)輕微腹脹等不良反應(yīng),2名(20%)出現(xiàn)明顯腹脹等中度不良反應(yīng),7名(70%)出現(xiàn)腹痛腹瀉等重度不良反應(yīng),收集結(jié)束時3名(30%)健康志愿者未收集到尿液。(2)甘露醇回歸方程:y=1.096x+6.510,乳果糖回歸方程:y=1.032x+6.362,其中,x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度的常用對數(shù),y為標(biāo)準(zhǔn)品峰面積的常用對數(shù)。(3)健康對照組尿樣中可檢測到甘露醇,其回收量、回收率分別為92.35mg(14.60~209.4mg),1.85%(0.29~4.19%),未檢測到乳果糖,l/m值為0.00(0.00~0.00);aih患者尿樣中乳果糖回收量、乳果糖回收率、l/m值與健康對照組相比,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,其甘露醇回收量362.22mg(176.67~515.36mg)、甘露醇回收率7.24%(3.53~10.31%)與健康對照組相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=0.023、0.023);aih肝硬化患者尿樣中甘露醇回收量414.54mg(276.53~931.18mg)、回收率8.29%(5.53~18.62%)、乳果糖回收量33.40mg(6.80~48.31mg)、回收率0.37%(0.09~0.64%)及l(fā)/m值0.05(0.02~0.10)與健康對照組[92.35mg(14.60~209.4mg)、1.85%(0.29~4.19%)、0.00mg(0.00~0.00mg)、0.00%(0.00~0.00%)、0.00(0.00~0.00)]相比,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=0.021、0.021、0.014、0.014、0.014);aih肝硬化患者尿樣中乳果糖回收量33.40mg(6.80~48.31mg)、回收率0.37%(0.09~0.64%)、l/m值0.05(0.02~0.10)與aih患者[0.00mg(0.00~6.33mg)、0.00%(0.00~0.06%)、0.00(0.00~0.03)]相比,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=0.004、0.004、0.007)。第二部分:aih患者肝臟巨噬細(xì)胞極化分型評價(1)aih患者肝組織巨噬細(xì)胞數(shù)量增多:aih患者與脂肪肝患者、乙肝患者相比,cd68陽性細(xì)胞絕對數(shù)均顯著增多(p=0.034、0.034),脂肪肝患者與乙肝患者相比cd68陽性細(xì)胞絕對數(shù)間的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(2)aih患者肝組織m2型巨噬細(xì)胞相對低表達(dá):脂肪肝患者與aih患者、乙肝患者相比,cd206陽性細(xì)胞絕對數(shù)顯著增多(p=0.019、0.046),aih患者與乙肝患者相比cd206陽性細(xì)胞絕對數(shù)間的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;脂肪肝患者肝組織cd206相對表達(dá)量顯著高于aih患者和乙肝患者[(8.08±1.63)比(1.03±0.12)、(2.36±1.32)],差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p均0.05),而aih患者和乙肝患者肝組織cd206相對表達(dá)量差異并沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;aih患者肝組織il-10相對表達(dá)量顯著高于乙肝患者[(2.16±0.89)比(0.93±0.59)],差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),而aih患者與脂肪肝患者相比、乙肝患者與脂肪肝患者相比,肝組織il-10的相對表達(dá)量差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(3)aih患者肝組織m1型巨噬細(xì)胞相對高表達(dá):aih患者、乙肝患者肝組織中存在cd68與inos共表達(dá)的m1型巨噬細(xì)胞,脂肪肝患者和肝囊腫患者肝組織中鮮見cd68與inos共表達(dá)的m1型巨噬細(xì)胞;aih患者和乙肝患者肝組織tnf-α相對表達(dá)量均顯著高于脂肪肝患者[(13.29±7.55)、(12.39±3.79)比(0.77±0.38)],差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均0.05),而AIH患者和乙肝患者TNF-α相對表達(dá)量的差異并無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;AIH患者和乙肝患者肝組織iNOS相對表達(dá)量均顯著高于脂肪肝患者[(12.22±5.13)、(10.42±4.27)比(1.25±0.77)],差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均0.05),而AIH患者和乙肝患者iNOS相對表達(dá)量的差異并無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;AIH患者和乙肝患者肝組織IL-1β相對表達(dá)量顯著高于脂肪肝患者[(5.90±3.01)、(12.19±3.71)比(1.76±1.42)],差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均0.05),乙肝患者肝組織IL-1β的相對表達(dá)量顯著高于AIH患者,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:(1)健康對照者對于相同劑量的乳果糖、甘露醇耐受差,應(yīng)注重探索一個檢測敏感、耐受良好的實(shí)驗(yàn)劑量。健康對照組無腸屏障功能的改變,肝硬化患者確有L/M值的增大、腸屏障功能的改變,與前兩者相比本研究似傾向于提示AIH患者腸屏障功能尚正常,但未來應(yīng)在優(yōu)化方法的基礎(chǔ)上擴(kuò)大樣本量進(jìn)一步驗(yàn)證。(2)AIH患者炎癥反應(yīng)及肝損傷過程中巨噬細(xì)胞活化并以M1促炎表型為多。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】:天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2016
【分類號】:R575.1

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本文編號:2384123

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