發(fā)布時間：2020-11-18 01:29

　　 目的:觀察在使用恩替卡韋聯(lián)合強的松對HBV感染小鼠體內(nèi)病毒復制表達的影響，了解抗病毒的情況下使用強的松是否會導致HBV復制型小鼠體內(nèi)病毒復制表達增強。 方法： 1.檢測強的松對HBV感染小鼠體內(nèi)病毒復制表達的影響 采用高壓注射體內(nèi)轉(zhuǎn)染法將HBV復制型重組質(zhì)粒pAAV/HBV1.2導入雄性BALB/C小鼠，轉(zhuǎn)染后24h按體重、血清HBeAg水平對小鼠進行配對，分為實驗組和對照組。實驗組給予強的松200μg/只,溶于0.2ml生理鹽水灌胃，對照組給予等量生理鹽水處理。于處理后第3、7、10、16、22天處死小鼠，每個時間點實驗組和對照組各3-4只。采用real-time PCR（實時熒光定量PCR）檢測小鼠血清HBV-DNA(Hepatitis B virus DNA,乙型肝炎病毒DNA)、（HBV-DNA檢測下限為500copies/ml）；化學發(fā)光法檢測血清中HBeAg（Hepatitis B eAntigen，乙肝病毒e抗原）和HBsAg（Hepatitis B surface antigen，乙肝病毒表面抗原）。 2.檢測恩替卡韋對HBV感染小鼠體內(nèi)病毒復制表達的影響 造模方法同第一步，轉(zhuǎn)染后24h按體重、血清HBeAg水平對小鼠進行配對，分為實驗組和對照組。實驗組給予恩替卡韋1.5μg/只，溶于0.2ml生理鹽水灌胃，對照組給予等量生理鹽水處理。于處理后第1、3、6、11天處死小鼠，每個時間點實驗組和對照組各3-4只。采用real-time PCR檢測小鼠血清HBV-DNA、化學發(fā)光法檢測血清中HBeAg和HBsAg。 3.檢測在不同時間給予恩替卡韋和強的松對HBV感染小鼠體內(nèi)病毒復制表達的影響 造模方法同第一步，轉(zhuǎn)染24h后按體重、血清HBeAg水平對小鼠進行配對，分為6組實驗組和3組對照組，每組3~4只。其中4組實驗組在分組當天（本實驗中定為第0天）給予恩替卡韋灌胃，1.5μg/只，溶于0.2ml生理鹽水中，并分別于第0、1、3、7天給于強的松處理，400μg/只，溶于0.2ml生理鹽水；剩余2組實驗組在第0天給予強的松，并于第3、7天給予恩替卡韋；3組對照組分別設為恩替卡韋、強的松、生理鹽水對照組；每組均在給予強的松灌胃16天后處死，留存血清。采用real-time PCR檢測小鼠血清HBV-DNA�；瘜W發(fā)光法檢測血清中HBeAg和HBsAg。 結(jié)果： 一、強的松對HBV感染小鼠體內(nèi)病毒復制表達的影響 1、強的松對小鼠血清HBV-DNA影響 1、實驗第3、7、10天強的松實驗組和生理鹽水對照組血清HBV-NDA檢測均為陽性，其平均值達105copies/ml,無明顯差別；而在實驗第16天兩組平均值分別為1.83×105,3.07×103copies/ml，兩組比較相差2lg,實驗組明顯高于對照組。實驗第22天兩組平均值分別為：2.03×104,1.99×103copies/ml，實驗組明顯高于對照組。 2、強的松對HBV小鼠血清HBsAg、HBeAg的影響 實驗第3、7、10天實驗組和對照組小鼠血清HBsAg無明顯差別；第16天實驗組和對照組小鼠血清HBsAg平均值分別為：53.35IU/ml、1.97IU/ml，實驗組高于對照組；第22天HBsAg水平仍高于對照組。實驗第3、7、10天小鼠血清實驗組和對照組HBeAg無明顯差別；第16天小鼠血清HBeAg實驗組明顯高于對照組;第22天小鼠血清HBeAg實驗組仍高于對照組。 二、恩替卡韋對HBV感染小鼠體內(nèi)病毒復制表達的影響 1、恩替卡韋對小鼠血清HBV-DNA影響 實驗組和對照組小鼠在第1天血清HBV-DNA均達104copies/ml，無明顯差異；第3天實驗組和對照組平均值為104copies/ml,105copies/ml,實驗組明顯低于對照組；第6天檢測實驗組其中1只為陰性，2只為陽性，其值為102copies/ml，對照組都為陽性，其平均值為5.27×105copies/ml;實驗組明顯低于對照組；第11天檢測實驗組均為陰性，對照組檢測均為陽性平均值為104copies/ml，對照組明顯高于實驗組。 2、恩替卡韋對小鼠血清HBsAg、HBeAg的影響 實驗第1、3、6、11天實驗組和對照組小鼠血清HBsAg水平無明顯差別；實驗第1、3、6、11天小鼠血清實驗組和對照組HBeAg水平無明顯差別。 三、恩替卡韋和強的松對HBV感染小鼠體內(nèi)病毒復制表達的影響 1、恩替卡韋和強的松對小鼠血清HBV-DNA的影響 生理鹽水對照組小鼠血清HBV-DNA平均值為2.1×103copies/ml；預先給予恩替卡韋的4組實驗組中，在第7、3、1、0天給予強的松灌胃后，在試驗終點HBV-DNA均為陰性；預先給予強的松的2組實驗組中，在第3天給予恩替卡韋小鼠血清中HBV-DNA平均值為2.21×103copies/ml，與生理鹽水對照組無明顯差別；在第7天給予恩替卡韋組，小鼠血清HBV-DNA平均值為1.29×104copies/ml，高于生理鹽水對照組也明顯高于3天組。 2、恩替卡韋和強的松對小鼠血清HBsAg、HBeAg的影響 預先給予恩替卡韋，并分別在7、3、1、0天給予強的松的4組實驗組，血清HBsAg水平均低于生理鹽水組，各組之間無明顯差異；預先給予強的松并分別于第3、7天給予恩替卡韋的2組實驗組中，小鼠血清HBsAg水平都低于生理鹽水組，且兩組之間無明顯差異。預先給予恩替卡韋，并分別在7、3、1、0天給予強的松的4組實驗組血清HBeAg水平都低于生理鹽水組，但其水平隨著恩替卡韋預先處理的時間延長而降低；預先給予強的松并分別于第3、7天給予恩替卡韋的實驗組小鼠，血清HBeAg都低于生理鹽水組，7天組稍高于3天組。 結(jié)論： HBV復制型小鼠在給予強的松處理之前預先給予或同時給予恩替卡韋處理可抑制HBV-DNA復制，有效避免強的松引起的HBV再激活。 給予強的松處理后延遲3天給予恩替卡韋即不能阻斷強的松對小鼠體內(nèi)HBV再激活，延遲越久效果越差。
【學位單位】：川北醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2014
【中圖分類】：R512.62
【文章目錄】：
致謝
摘要
Abstract
前言
材料與方法
結(jié)果
討論
結(jié)論
參考文獻
綜述：HBV 相關重型肝炎發(fā)病機制研究進展及糖皮質(zhì)激素的應用
    參考文獻
附錄
個人簡歷

【參考文獻】

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本文編號：2888169