發(fā)布時間：2020-12-09 06:49

　　目的:探討非AIH炎癥在引發(fā)自身免疫性肝炎中發(fā)揮的作用。方法:（1）小鼠尾靜脈注射不同劑量的質粒p CYP2D6,72 h后取小鼠肝組織,使用Western Blot方法檢測小鼠肝臟中人CYP2D6蛋白表達情況。（2）Ad或CCl4感染小鼠后,在第5、10、15天取血清,使用ALT試劑盒檢測血清ALT水平。（3）觀察CCl4注射次數(shù)不同引發(fā)的炎癥的特點。（4）Ad或CCl4感染小鼠后,在不同時間點取肝組織,提取總RNA,反轉錄后Real-time PCR檢測與炎癥有關的基因Tnfa,Il6,Il1b的表達。（5）尾靜脈注射質粒p CYP2D6,并且尾靜脈注射Ad或腹腔注射CCl4構建自身免疫性肝炎模型。（6）在Ad/p CYP2D6組和CCl4/p CYP2D6組,尾靜脈持續(xù)注射質粒p CYP2D6,觀察是否誘發(fā)更加嚴重的自身免疫應答和自身免疫性肝炎。（7）ELISA檢測不同處理組小鼠血清中抗CYP2D6抗體和抗肝蛋白抗體滴度。（8）肝組織切片HE染色,觀察炎癥細胞浸潤情況。（9）肝組織切片天狼星紅染色,觀察纖維化情況。結果:（1）不同劑量的質粒p CYP2D6通過尾靜脈注射在肝組織中... 

【文章來源】：華中科技大學湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

Ad和pCYP2D6的注射時間

pCYP2D6 的量 10、20、50、100、200 μg 分別和 Ad 注射小鼠，第 28 天檢測的血清抗體結果顯示，在小鼠體內(nèi)只注射 Ad 是沒有抗體產(chǎn)生的；只注射質粒pCYP2D6 時，有抗 CYP2D6 抗體產(chǎn)生，滴度很低，但沒有抗肝蛋白抗體產(chǎn)生；當質粒 pCYP2D6 和腺病毒 Ad 共同處理小鼠時，可以看到既有抗 CYP2D6 抗體也有抗肝蛋白的抗體產(chǎn)生，與只注射質粒 pCYP2D6 組產(chǎn)生的抗體有顯著差異10 、20、50 μg 質粒的量分別與 Ad 處理小鼠產(chǎn)生的抗 CYP2D6 抗體和抗肝蛋白抗體滴度逐漸升高，50、100、200 μg 質粒的量分別與 Ad 處理小鼠產(chǎn)生的抗CYP2D6 抗體和抗肝蛋白抗體滴度升高的幅度很�。▓D 1-2B）。由此可知不同劑量的模擬抗原和 Ad 誘發(fā)不同程度的自身免疫反應。此實驗結果表明，Ad 與模擬抗原共同處理小鼠時才能誘發(fā)自身免疫應答，Ad 促進了模擬抗原誘發(fā)自身免疫應答。Ad 和人 CYP2D6 誘發(fā)自身免疫應答與Ad 的存在以及 CYP2D6 表達量有關。模擬抗原可以不是病毒的成分。

華 中 科 技 大 學 碩 士 學 位 論 文2、模擬抗原持續(xù)表達加強自身免疫應答Ad 和質粒 pCYP2D6 誘發(fā)的自身免疫應答有質粒劑量依賴性，那么增加質粒注射次數(shù)也就是模擬抗原持續(xù)表達會不會加強自身免疫應答呢？為了探究該問題，我們增加質粒的注射次數(shù)，使模擬抗原持續(xù)表達，與模擬抗原不持續(xù)表達組比較，觀察兩組產(chǎn)生的抗體是否有差異。根據(jù)第一部分的結果 Ad 與 50、100、200 μg 質粒 pCYP2D6 共同處理小鼠誘發(fā)自身免疫應答產(chǎn)生的抗體滴度基本無變化，所以我們選擇用質粒 pCYP2D6 注射劑量是 50 μg。Ad 的劑量為1×109，尾靜脈注射，增加質粒 pCYP2D6 注射次數(shù)，注射時間如圖 2-1，質粒不持續(xù)注射組時間如圖 1-1，在第 49 天取血清檢測抗體滴度。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Auto immune hepatitis[J]. Nicole MF van Gerven,Ynto S de Boer,Chris JJ Mulder,Carin MJ van Nieuwkerk,Gerd Bouma.  World Journal of Gastroenterology. 2016(19)
[2]Juvenile autoimmune hepatitis: Spectrum of the disease[J]. Giuseppe Maggiore,Silvia Nastasio,Marco Sciveres.  World Journal of Hepatology. 2014(07)
[3]Hepatocellular carcinoma in patients with autoimmune hepatitis[J]. Andreas Teufel,Arndt Weinmann,Catherine Centner,Anja Piendl,Ansgar W Lohse,Peter R Galle,Stephan Kanzler.  World Journal of Gastroenterology. 2009(05)
[4]Aetiopathogenesis of autoimmune hepatitis[J]. Diego Vergani,Giorgina Mieli-Vergani.  World Journal of Gastroenterology. 2008(21)
[5]Low-dose tacrolimus ameliorates liver inflammation and fibrosis in steroid refractory autoimmune hepatitis[J]. Fin Stolze Larsen,Ben Vainer,Martin Eefsen,Peter Nissen Bjerring,Bent Adel Hansen.  World Journal of Gastroenterology. 2007(23)
[6]Hepatitis A vaccine associated with autoimmune hepatitis[J]. PA Berry,G Smith-Laing.  World Journal of Gastroenterology. 2007(15)



本文編號：2906471