發(fā)布時間：2021-03-08 18:09

  目的變應性鼻炎(allergic rhinitis, AR)是耳鼻咽喉-頭頸外科的常見病。鼻腔黏液高分泌是AR氣道慢性炎癥的重要病理生理改變。初步研究表明,苯環(huán)喹溴銨(bencycloquidium bromide, BCQB)作為一種新型的選擇性M1/M3受體拮抗劑,對AR展示了良好的療效。本研究擬通過離體和在體兩部分實驗進一步探討苯環(huán)喹溴銨對AR黏液高分泌的作用效果以及具體的調控機制。方法第一部分離體實驗中,通過改良的酶消化法分離細胞和無血清培養(yǎng)法進行了人鼻黏膜上皮細胞的原代培養(yǎng)；給予10-、10-7和10-8mol/L BCQB處理15min后,加入100μmol/L的卡巴可刺激,24h后用酶聯免疫吸附測定(enzyme-linked immunosorbent assay, ELI SA)方法測定黏蛋白5 AC (mucin 5AC, MUC5AC)的含量。第二部分在體實驗中,用卵清白蛋白(ovabumin, OVA)致敏Sprague-Dawley (SD)大鼠建立AR動物模型。給予BCQB治療后,進行大鼠鼻部癥狀的評估。收集鼻腔灌洗液用ELISA測定細胞因子(IL-6, IL-13和TNF-α)的蛋白水平和組胺濃度。提取大鼠鼻黏膜總蛋白用Western-blot方法測定黏蛋白MUC5AC, p38絲裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase, p38 MAPK),磷酸化p38 MAPK,細胞外調節(jié)蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases, ERK)和磷酸化ERK；鼻黏膜胞漿蛋白測定磷酸化核轉錄因子-κB (nuclear factor kappa B, NF-κB)(p65和p50)；鼻黏膜胞核蛋白測定NF-κB (p65和p50)。用實時定量PCR測定鼻黏膜IL-6、IL-13、TNF-α和MUC5AC的mRNA水平。另外,用甲苯胺藍染色、蘇木精-伊紅染色、阿利新藍-過碘酸雪夫染色和免疫組織化學染色(MUC5AC,磷酸化p38 MAPK,磷酸化ERK,NF-κB p50和NF-κB p65)觀察AR大鼠組織病理學的改變。結果BCQB能明顯抑制卡巴可誘導的人鼻黏膜上皮細胞黏蛋白MUC5AC的高分泌。在OVA致敏的SD大鼠中,鼻部給予苯環(huán)喹溴銨不僅能緩解鼻部的癥狀：包括鼻漏、鼻癢和噴嚏,而且能夠在蛋白水平和mRNA水平抑制代表炎性分泌的黏液蛋白MUC5AC的過表達。苯環(huán)喹溴銨抑制了鼻黏膜組胺的釋放和肥大細胞的聚集。IL-6、IL-13和TNF-α的蛋白水平和mRNA水平也被BCQB抑制。組織病理學研究表明了苯環(huán)喹溴銨緩解OVA導致的嗜酸性粒細胞浸潤,鼻黏膜損傷,杯狀細胞的增生／化生。另外,BCBQ能顯著降低AR大鼠鼻黏膜MAPK (p38 MAPK和ERK)磷酸化總量和磷酸化的比率,抑制NF-κB (p65和p50)核轉位和細胞漿的磷酸化。結論BCQB能夠緩解AR的黏液高分泌,減少炎性黏蛋白MUC5AC的分泌,此作用可能牽涉到對細胞因子(IL-6、IL-13和TNF-α)、組胺、信號通路MAPK (p38 MAPK和ERK)和NF-κB (p65和p50)的作用。BCQB非神經元型的抑制黏液MUC5AC分泌從而緩解AR慢性炎癥的作用,能夠為治療AR新藥的開發(fā)研制提供新的理論和實驗依據。
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R965

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本文編號：2123661