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肌醇需求激酶1抑制劑對(duì)染矽塵大鼠肺纖維化干預(yù)作用研究

發(fā)布時(shí)間:2020-10-25 02:29
   目的研究肌醇需求激酶1(IRE1)抑制劑對(duì)染矽塵大鼠肺纖維化內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(ERS)凋亡途徑的影響,評(píng)價(jià)IRE1抑制劑對(duì)大鼠矽肺纖維化的干預(yù)作用。方法無(wú)特定病原體(SPF)級(jí)健康成年雄性SD大鼠24只隨機(jī)分為對(duì)照組、矽肺組和IRE1組,每組8只。矽肺組和IRE1組大鼠均采用非氣管暴露法一次性注入質(zhì)量濃度為50.0 g/L的二氧化硅混懸液1.0mL造模,對(duì)照組注入等體積滅菌生理氯化鈉溶液。造模28 d后,IRE1組大鼠腹腔注射劑量為1.0 mg/kg體質(zhì)量的IRE1抑制劑,其余2組予等體積滅菌生理氯化鈉溶液,每7天注射1次,共4次。造模后第56天處死大鼠,收集左側(cè)肺泡灌洗液,分離、純化和培養(yǎng)肺泡巨噬細(xì)胞(AM)。觀(guān)察肺組織病理變化情況,實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)測(cè)定肺組織Ⅰ型和Ⅲ型前膠原mRNA相對(duì)表達(dá)水平,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)AM活性氧(ROS)陽(yáng)性率和線(xiàn)粒體去極化率,免疫印跡法測(cè)定肺組織內(nèi)IRE1α、天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-12、B細(xì)胞淋巴瘤/白血病-2蛋白(Bcl-2)和Bcl-2相關(guān)X蛋白(Bax)的相對(duì)表達(dá)水平。結(jié)果肺組織病理學(xué)檢查結(jié)果顯示,矽肺組肺組織可見(jiàn)炎細(xì)胞浸潤(rùn)和典型矽結(jié)節(jié)形成;IRE1組可見(jiàn)普遍炎細(xì)胞浸潤(rùn)和肺泡間隔變大,有彌漫性纖維化改變,但未見(jiàn)矽結(jié)節(jié)形成。IRE1組、矽肺組大鼠肺組織Ⅰ型、Ⅲ型前膠原mRNA相對(duì)表達(dá)水平和AM的ROS陽(yáng)性率、線(xiàn)粒體去極化率均高于對(duì)照組(P0.01),IRE1組上述4個(gè)指標(biāo)均低于矽肺組(P0.01)。IRE1組、矽肺組大鼠肺組織IRE1α、Caspase-12和Bax蛋白的相對(duì)表達(dá)水平均高于對(duì)照組(P0.01),IRE1組大鼠上述3個(gè)指標(biāo)均低于矽肺組(P0.01);但I(xiàn)RE1組和矽肺組大鼠肺組織Bcl-2相對(duì)表達(dá)水平均低于對(duì)照組(P0.01),IRE1組大鼠Bcl-2相對(duì)表達(dá)水平高于矽肺組(P0.01)。結(jié)論 IRE1參與的ERS凋亡通路可能在矽肺肺纖維化的發(fā)生和發(fā)展中發(fā)揮著重要作用;IRE1抑制劑可以通過(guò)阻斷IRE1通路拮抗ERS誘導(dǎo)的AM凋亡,從而拮抗肺纖維化。
【文章目錄】:
1 材料和方法
    1.1 材料
        1.1.1 動(dòng)物
        1.1.2 試劑和儀器
    1.2 方法
        1.2.1 動(dòng)物分組、造模和干預(yù)處理
        1.2.2 肺組織病理學(xué)觀(guān)察
        1.2.3 Real-time PCR法檢測(cè)肺組織Ⅰ型和Ⅲ型前膠原mRNA相對(duì)表達(dá)水平
        1.2.4 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)AM的ROS陽(yáng)性率和線(xiàn)粒體去極化率
        1.2.5 免疫印跡法檢測(cè)目的蛋白表達(dá)水平
    1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
2 結(jié)果
    2.1 各組大鼠肺組織病理變化
    2.2 各組大鼠肺組織Ⅰ型和Ⅲ型前膠原mRNA相對(duì)表達(dá)水平
    2.3 各組大鼠AM的ROS陽(yáng)性率和線(xiàn)粒體去極化率
    2.4 各組大鼠肺組織ERS凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)水平比較
3 討論

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