發(fā)布時間：2020-03-23 09:00

【摘要】：目的:研究雙白術內酯對谷氨酸(Glu)誘導損傷SH-SY5Y細胞和PC12細胞的保護作用,研究探討其作用機制,為進一步開發(fā)雙白術內酯成為中樞神經系統(tǒng)退行性疾病藥物提供新的理論依據。方法:用不同濃度的Glu處理體外培養(yǎng)的SH-SY5Y和PC12兩種細胞,分別建立谷氨酸誘導損傷SH-SY5Y細胞和PC12細胞模型。模型建立成功后,實驗分空白對照組、Glu損傷模型組、藥物對照組(低,中,高)三組。待細胞培養(yǎng)至70%時,用無血清處理細胞12小時,在分別用7.5mmol/L谷氨酸和10mmol/L谷氨酸孵育PC12細胞和SH-SY5Y細胞24h前提前30min加入不同濃度雙白術內酯。接著用MTT法檢測SH-SY5Y細胞和PC12細胞生長和增殖活性;用分光光度法測定其培養(yǎng)液上清中乳酸脫氫酶(LDH)的活性、用試劑盒檢測其ROS活性、羅丹明123檢測細胞線粒體電位變化、Annexin V-FITC/PI細胞凋亡檢測試劑盒檢測細胞凋亡率、吖啶橙(AO)/溴乙錠(EB)雙染色熒光染色法檢測細胞的凋亡形態(tài)變化,最后用western blot檢測相關蛋白Akt,P-Akt,GSK3β的變化。結果:當分別用模型濃度Glu孵育PC12細胞和SH-SY5Y細胞24h,細胞增殖活性明顯下降,生長情況受到影響,說明模型制造成功。用雙白術內酯預先保護后可見:細胞增殖活性得到提高,損傷形態(tài)明顯有所改善,LDH釋放減少,細胞凋亡率降低,ROS釋放活性降低,線粒體電位升高,并且呈濃度依賴性。WB結果表明P-Akt蛋白表達水平升高,GSK3β蛋白表達水平降低。結論:雙白術內酯對Glu誘導的SH-SY5Y細胞和PC12細胞損傷呈濃度依賴性保護作用,其作用機制可能是通過抑制PI3k-Akt-GSK3β通路發(fā)揮保護作用。
【圖文】：

圖1-2雙白術內酯抗AD作用機制

實驗結果表明，，7.5mmol/L Glu 對 PC12 細胞的增殖制率達到 48.2±1.5%（P<0.001）（見圖 4-1），然而 155Y 細胞的增殖有明顯的抑制作用，抑制率達到 39.1±2.1
【學位授予單位】：湖南師范大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R285.5

【參考文獻】

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本文編號：2596503