發(fā)布時(shí)間：2020-03-23 12:11

【摘要】：目的:探討黃連提取物對(duì)白念珠菌絲侵襲口腔念珠菌病(Oropharyngeal candidiasis,OPC)小鼠口腔的抑制作用及機(jī)制,旨在為其治療口腔念珠菌病提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:1.首先回流醇提取中藥黃連得黃連提取物(Extract of Coptidis Rhizoma,ECR)后,從體內(nèi)體外兩方面實(shí)驗(yàn)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。(1)體內(nèi)實(shí)驗(yàn):構(gòu)建小鼠口腔念珠菌病(OPC)模型,使用結(jié)晶紫染色、HE染色、PAS染色及小鼠整體表現(xiàn)檢測(cè)來(lái)驗(yàn)證OPC模型構(gòu)建是否成功。模型成功后分為正常對(duì)照組、模型組、ECR高濃度組(240 mg/mL)、ECR中濃度組(120 mg/mL)、ECR低濃度組(60 mg/mL)、制霉菌素陽(yáng)性藥組(135 mg/mL);給予高、中、低濃度的ECR和制霉菌素進(jìn)行口腔涂抹治療,每天3次,正常對(duì)照組和模型組小鼠則以生理鹽水涂抹。持續(xù)干預(yù)10天后,通過(guò)小鼠癥狀和體征、真菌鏡檢、真菌載荷量測(cè)定以及組織病理學(xué)檢查來(lái)評(píng)價(jià)ECR的療效;以掃描電鏡、熒光顯微鏡等來(lái)觀察ECR對(duì)白念珠菌絲侵襲小鼠口腔黏膜組織的影響。(2)體外實(shí)驗(yàn):以XTT還原法評(píng)價(jià)ECR對(duì)白念珠菌絲代謝活性的影響;固體平板上觀測(cè)ECR對(duì)白念珠菌落邊緣生長(zhǎng)變化影響;半固體培養(yǎng)基上觀測(cè)ECR對(duì)白念珠菌絲生長(zhǎng)影響;液體培養(yǎng)基上ECR對(duì)白念珠菌菌絲生長(zhǎng)情況影響;掃描電鏡下觀察ECR對(duì)白念珠菌絲形態(tài)的影響;熒光顯微鏡觀察ECR對(duì)白念珠菌絲形態(tài)及活力的影響;使用qRT-PCR法檢測(cè)ECR對(duì)白念珠菌絲侵襲素ALS3、SSA1基因表達(dá)變化的影響。結(jié)果:體內(nèi)實(shí)驗(yàn)表明,結(jié)晶紫染色、HE染色、PAS染色及小鼠癥狀體征的檢測(cè)能夠驗(yàn)證OPC模型構(gòu)建成功;中濃度組ECR對(duì)OPC小鼠舌組織黏膜損傷有一定療效,高濃度組ECR能完全恢復(fù)OPC小鼠舌黏膜的損傷;體外實(shí)驗(yàn)表明,XTT法顯示隨著ECR濃度的升高(64、128、256 mg/mL),白念珠菌菌絲代謝活力逐漸降低;在固體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基上,128、256 mg/mL ECR能顯著抑制白念珠菌落邊緣生長(zhǎng)、菌絲形成,及菌絲的侵襲能力;掃描電鏡與熒光顯微鏡發(fā)現(xiàn)128、256 mg/mL ECR能顯著影響菌絲形成;qRT-PCR法顯示,64、128、256 mg/mL ECR能下調(diào)侵襲素ALS3、SSA1基因表達(dá)。結(jié)論:體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)顯示,黃連提取物(ERC)能通過(guò)抑制白念珠菌菌絲的形成,抑制菌絲侵襲素ALS3,SSA1基因的表達(dá)降低其對(duì)口腔黏膜的侵襲力,從而發(fā)揮其治療OPC的作用。
【圖文】：

圖 1 a. OPC 造模后小鼠口腔臨床評(píng)分(n=10)圖 1b. OPC 造模后小鼠體重下降率（n=10）Fig. 1a Oral clinical score of OPC model mice (n = 10)Fig. 1b Weight loss rate of OPC model mice (n = 10).2 口腔念珠菌鑒定及結(jié)晶紫染色（1）為保證感染小鼠口腔造模是白念珠菌感染，我們?cè)诳片敿握婢�顯色涂布鑒別了小鼠口腔造模前后的菌種。結(jié)果表明，造模后棉簽涂布培養(yǎng)為綠色或者翠綠色，，鑒定確是白念珠菌感染小鼠口腔黏膜，如圖 2。

）小鼠感染第 1、3、5、7 天感染情況變化：第 1 天，僅可見(jiàn)脫有酵母態(tài)白念珠菌；第 3、5 天涂布染色發(fā)現(xiàn)有部分芽管狀白念布染色可見(jiàn)細(xì)長(zhǎng)菌絲；擦拭小鼠口腔黏膜表面，涂布染結(jié)晶紫后數(shù)增加，口腔中負(fù)載白念珠菌量逐漸增加，白念珠菌也從酵母而長(zhǎng)成較長(zhǎng)菌絲，如圖 3。
【學(xué)位授予單位】：安徽中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類(lèi)號(hào)】：R285.5

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本文編號(hào)：2596704