發(fā)布時間：2020-07-05 21:31

【摘要】：目的:探討蠣昆一號抑制人結(jié)腸癌細胞HCT-116增殖及其對5-Fu誘導小鼠骨髓抑制損傷保護作用與作用機制。方法:(1)采用不同濃度(0.25、0.5、1、2、4mg/ml)蠣昆一號處理人結(jié)腸癌細胞HCT-116,CCK8法檢測HCT-116細胞增殖情況,流式細胞術(shù)檢測HCT-116細胞凋亡率,Western blot檢測HCT--116凋亡相關(guān)蛋白Bax、Bad、Bcl-2、Akt、caspase3表達;(2)60只純系雄性BALB/c小鼠,隨機分為正常對照組(Control)、5-Fu組(Model)、重組人粒細胞集落刺激因子組(rhG-CSF)、蠣昆一號制劑低、中、高劑量組(133、200、300mg/kg)。腹腔注射5-Fu(250mg/kg)復制小鼠骨髓抑制模型,對照組注射等容積生理鹽水;注射后第2天,灌胃給予不同劑量的蠣昆一號,正常組和模型組灌胃給予等容積的生理鹽水,陽性對照組腹腔注射rhG-CSF(250μg/kg),連續(xù)給藥7天。每天觀察小鼠的一般狀況(毛發(fā),飲食,活動,是否腹瀉等),在實驗結(jié)束時,眼眶采血,骨髓涂片,頸椎脫臼法處死小鼠,解剖取脾臟凍存于-80℃冰箱,用于后續(xù)的實驗。采用全自動血細胞分析儀,計數(shù)外周血細胞(WBC、PLT、LY、MO%);ELISA法檢測血清TNF-α、IL-2的含量;Western blot法檢測脾臟組織JAK2、STAT5、p-JAK2、p-STAT5蛋白表達。結(jié)果:(1)不同濃度蠣昆一號處理HCT-116細胞48h,各濃度顯著抑制結(jié)腸癌細胞HCT-116增殖(P0.01),1mg/ml蠣昆一號處理不同小時,24h時抑制其增殖(P0.05),時間延長,顯著抑制其增殖(P0.01),2mg/ml、4mg/ml促進其凋亡(P0.05),蠣昆一號顯著性上調(diào)Bax、Bad、caspase-3蛋白的表達(P0.05),2mg/ml、4mg/ml顯著下調(diào)Bcl-2、Akt、p-Akt蛋白的表達(P0.01);(2)與正常對照組比較,模型組小鼠體重顯著性下降(P0.05),且均出現(xiàn)腹瀉癥狀(P0.05),骨髓涂片結(jié)果顯示,模型組小鼠骨髓增生極度低下,外周血白細胞、血小板、淋巴細胞的數(shù)量顯著性減少(P0.05),單核細胞比率顯著性升高(P0.05),TNF-α的含量顯著性升高(P0.05),IL-2的含量顯著性下降(P0.05),脾臟組織中p-JAK2、p-STST5蛋白表達明顯下降(P0.05);與模型組比較,蠣昆一號低劑量組體重減輕癥狀明顯改善(P0.05),能夠顯著改善5-Fu引起的腹瀉癥狀,骨髓涂片結(jié)果顯示,給予不同劑量的蠣昆一號后,增生程度有所改善,血常規(guī)檢測結(jié)果顯示,蠣昆一號低劑量組小鼠白細胞、淋巴細胞均有不同程度的升高(P0.05),單核細胞比率降低(P0.05),中、高劑量顯著升高白細胞、淋巴細胞和血小板數(shù)(P0.01),降低單核細胞比率(P0.01),蠣昆一號各劑量組小鼠血清TNF-α的水平顯著下降(P0.01),中、高劑量組IL-2的水平升高(P0.05),Western blot結(jié)果顯示,蠣昆一號中、高劑量組能夠顯著上調(diào)p-JAK2、p-STAT5的表達(P0.05)。結(jié)論:(1)蠣昆一號能抑制結(jié)腸癌細胞HCT-116細胞增殖,可能是通過上調(diào)Bax、Bad、cleaved caspase-3蛋白,下調(diào)Bcl-2、Akt、p-Akt蛋白,促進細胞凋亡,發(fā)揮抗腫瘤作用(2)蠣昆一號能夠緩解5-Fu所致小鼠的腹瀉癥狀,減輕5-Fu所致骨髓抑制損傷,其機制可能是通過上調(diào)p-JAK2、p-STAT5蛋白的表達,減輕TNF-α的釋放,增加IL-2的含量來實現(xiàn)的。
【學位授予單位】：貴州醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5
【圖文】：

圖 1 蠣昆一號對 HCT-116 細胞活力的影響（ x±S，n=5Fig1 Li kun No.1 inhibited cell viablitity( x±S，n=5）抑制結(jié)腸癌細胞 HCT-116 增殖。用 0.25，0.5，1，2 或 4mg/m

圖 2 蠣昆一號對 HCT-116 細胞活力的影響（ x±S，n=Fig2 Li kun No.1 inhibited cell viablitity( x±S，n=5）抑制結(jié)腸癌細胞 HCT-116 增殖。1mg/ml 干預細胞 0 至 96h，＜0.01

圖 3 蠣昆一號對 HCT-116 細胞凋亡的影響（ x±S，n=5）Fig3 Li kun No.1 induced apoptosis ( x±S，n=5）：蠣昆一號誘導結(jié)腸癌細胞 HCT-116 凋亡，與對照組比較：*P＜0.053 蠣昆一號對人結(jié)腸癌細胞 HCT-116Bax、Bad、Bcl-2 的影響

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本文編號：2743150