發(fā)布時間：2020-07-10 00:21

【摘要】：目的:觀察金釵石斛總生物堿(Dendrobium nobile Lindl alkaloid,DNLA)對SAMP8小鼠腦衰老的影響,并探討其作用機制。方法:6月齡SAMP8小鼠隨機分為4組:SAMP8模型組、DNLA低、高劑量組、陽性藥組,同月齡SAMR1小鼠作為空白對照。藥物均用1%的吐溫80配制,DNLA低、高劑量組分別給予DNLA 20、40 mg/kg,陽性藥組給予二甲雙胍80mg/kg,每日一次連續(xù)灌胃6個月,SAMR1對照組和SAMP8模型組給予同等體積1%的吐溫80。給藥結(jié)束前,采用Morris水迷宮實驗,Y迷宮實驗,新物體識別實驗,轉(zhuǎn)棒實驗,曠場實驗等方法檢測小鼠學習記憶及運動功能;測定小鼠體重,稱取小鼠腦組織濕重,用于測定腦組織濕重比;衰老特異性β-半乳糖苷酶染色檢測腦組織衰老情況;HE和尼氏染色觀察海馬CA1區(qū)和皮質(zhì)神經(jīng)元損傷情況;Western blot測定小鼠海馬和皮質(zhì)中衰老蛋白Klotho的表達,Aβ生成及降解途徑中Aβ、APP、BACE1、PS1、IDE、NEP蛋白水平,自噬相關(guān)蛋白LC3B、Beclin1、P62的表達水平。結(jié)果:SAMP8較SAMR1小鼠逃避潛伏期明顯延長,原平臺象限停留時間縮短,Y迷宮自發(fā)探索交替行為正確率降低,探索新物體的時間占總時間的百分比有所下降但無差異,轉(zhuǎn)棒潛伏期縮短,中央?yún)^(qū)域和外周區(qū)域運動的總路程明顯縮短;腦組織濕重比降低;β-半乳糖苷酶染色的腦組織衰老細胞數(shù)量增多;海馬CA1區(qū)和皮質(zhì)神經(jīng)元損傷,細胞排列紊亂,正常神經(jīng)元細胞數(shù)量減少;海馬和皮質(zhì)Aβ、APP、BACE1、PS1、P62蛋白表達升高,LC3B、Beclin1、IDE、NEP、Klotho蛋白表達降低。與SAMP8模型組相比,DNLA給藥及陽性給藥組逃避潛伏期縮短,原平臺象限停留時間延長,Y迷宮自發(fā)探索交替行為正確率升高,探索新物體的時間占總時間的百分比無明顯改變,轉(zhuǎn)棒潛伏期延長,中央?yún)^(qū)域和外周區(qū)域運動的總路程無顯著改變;腦組織濕重比增加;β-半乳糖苷酶染色的腦組織衰老細胞數(shù)量減少;海馬CA1區(qū)和皮質(zhì)神經(jīng)元正常,細胞排列整齊,正常神經(jīng)元細胞數(shù)量增加;海馬和皮質(zhì)Aβ蛋白水平降低,Klotho衰老蛋白水平升高,生成Aβ代謝途徑中的APP、BACE1、PS1蛋白水平降低,Aβ降解酶IDE、NEP蛋白水平升高,而自噬相關(guān)蛋白P62蛋白水平降低,LC3B、Beclin1蛋白水平升高。結(jié)論:本實驗條件下,金釵石斛總生物堿對SAMP8小鼠有延緩衰老的作用,其作用機制可能與上調(diào)Klotho蛋白,減少Aβ聚集、增強自噬活性有關(guān)。
【學位授予單位】：遵義醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5
【圖文】：

遵義醫(yī)學院碩士學位論文 呂凌麗2 結(jié)果2.1 DNLA 對 SAMP8 小鼠學習記憶的影響2.1.1 Morris 水迷宮實驗Morris 水迷宮檢測 SAMP8 小鼠學習記憶功能。實驗結(jié)果顯示（如圖 1），與SAMR1 相比，定向航行中 SAMP8 小鼠的逃避潛伏期有所延長(P<0.05)，空間探索中原平臺象限停留時間縮短(P<0.05)，DNLA 及二甲雙胍給藥后，SAMP8小鼠逃避潛伏期縮短，原平臺象限停留時間延長(P<0.05)。提示 DNLA 能改善SAMP8 小鼠的學習記憶功能。

圖 2DNLA 對 SAMP8 小鼠學習記憶障礙的影響.A.Y 迷宮自發(fā)探索行為，B.新物體識別新物體探索時間占總時間的百分比，（ x ±SD，n=6-10），與 SAMR1相比，*P�d0.05；與 SAMP8相比，#P�d0.05。Fig. 2 Effect of DNLA on learning and memory deficits in SAMP8 mice. A. The correct rate ofY Maze test spontaneous alternation. B. The New object time percentage of total time in objectrecognition test (ORT). ( ±SD, n=6-10),*P<0.05 vs SAMR1,#P<0.05 vs SAMP82.2 DNLA 對 SAMP8 小鼠運動功能的影響2.2.1 轉(zhuǎn)棒實驗和曠場實驗轉(zhuǎn)棒實驗是評價小鼠運動平衡能力的自動化方法。如圖 3A 所示，SAMP8組與 SAMR1 組相比，潛伏期即從旋轉(zhuǎn)桿上脫落的時間明顯縮短(P<0.05)，DNLA及二甲雙胍給藥后潛伏期顯著延長(P<0.05)，結(jié)果表明，DNLA可以減輕 SAMP8小鼠的運動功能障礙。曠場實驗主要評價以情感行為為主的運動能力，小鼠自主活動的總路徑能體現(xiàn)小鼠運動情況。如圖 3B 所示，中央?yún)^(qū)域和外周區(qū)域運動的總路程 SAMP8 組

圖 3：DNLA 對 SAMP8 小鼠運動功能的影響.A.轉(zhuǎn)棒潛伏期，B.曠場中央?yún)^(qū)域和外周區(qū)域總路程，（ x ±SD，n=6-10）與 SAMR1相比，*P�d0.05；與 SAMP8 相比，#P�d0.05。Fig. 3 Effect of DNLA on motor disorder in SAMP8 mice. A. The escape latency of the rotatingrod test. B. The total distance in central and peripheral areas of Open Field test. ( ±SD, n=6-10)*P<0.05 vs SAMR1,#P<0.05 vs SAMP8.2.3 DNLA 對 SAMP8 小鼠腦組織濕重比的影響衰老的腦組織萎縮，如圖 4 所示腦組織濕重比結(jié)果顯示，SAMP8 小鼠腦組織濕重比較 SAMR1 小鼠明顯降低(P<0.05)，DNLA40 mg/kg組和二甲雙胍給藥組較 SAMP8 組腦組織濕重比顯著升高(P<0.05)，提示 DNLA能改善 SAMP8小鼠的腦萎縮。

【參考文獻】

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本文編號：2748193