發(fā)布時(shí)間：2024-05-24 19:46

　　目的探究高三尖杉酯堿(homoharringtonine, HHT)對(duì)人黑色素瘤A375增殖的影響及可能的作用機(jī)制。方法采用CCK-8法檢測(cè)HHT對(duì)A375細(xì)胞增殖的影響;Hoechst 33258染色法觀察染色質(zhì)凝集情況;細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)HHT對(duì)A375細(xì)胞克隆形成能力的影響;流式細(xì)胞術(shù)(Flow cytometry, FCM)檢測(cè)HHT對(duì)A375細(xì)胞凋亡和周期影響;Western blot檢測(cè)Bcl-2、Bax、Cleaved-caspase 3、Cleaved-PARP、CyclinB1和CDK1蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果 CCK-8結(jié)果顯示,隨著藥物的劑量(0、0.05、0.1、0.2、0.4、0.8μmol·L^-1)和作用時(shí)間(24、48、72 h)增加,HHT對(duì)A375細(xì)胞的抑制作用逐漸增強(qiáng);Hoechst 33258染色和FCM結(jié)果顯示,HHT可使A375細(xì)胞染色質(zhì)呈凋亡形態(tài)改變,促進(jìn)細(xì)胞凋亡,將A375的細(xì)胞周期阻滯于G₂/M期;克隆形成實(shí)驗(yàn)顯示,HTT可以抑制A375細(xì)胞的克隆形成能力;Western blot結(jié)果表明HHT可...

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
1 材料
    1.1 細(xì)胞株
    1.2 藥物與試劑
    1.3 儀器
2 方法
    2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
    2.2 藥物配置
    2.3 CCK-8法檢測(cè)A375細(xì)胞活力
    2.4 Hoechst 33258 染色實(shí)驗(yàn)
    2.5 細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)
    2.6 FCM檢測(cè)細(xì)胞凋亡
    2.7 FCM檢測(cè)細(xì)胞周期
    2.8 免疫印跡實(shí)驗(yàn)(Western blot)檢測(cè)相關(guān)蛋白的表達(dá)
    2.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
3 結(jié)果
    3.1 HHT抑制A375細(xì)胞的增殖
    3.2 HHT促進(jìn)A375細(xì)胞發(fā)生凋亡
    3.3 HHT誘導(dǎo)A375細(xì)胞周期阻滯于G2/M期
    3.4 HHT降低A375細(xì)胞的克隆形成能力
    3.5 Western blot檢測(cè)A375細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)
    3.6 Western blot檢測(cè)A375細(xì)胞周期相關(guān)蛋白的表達(dá)
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