發(fā)布時間：2024-06-30 21:44

　　Ikaros作為一種重要的轉(zhuǎn)錄因子,在正常造血系統(tǒng)中發(fā)揮著非常重要的作用。在腫瘤細(xì)胞中Ikaros能發(fā)揮腫瘤抑制或腫瘤促進(jìn)作用,但是它在急性髓系白血病(AML)中的作用尚不明確。我們的研究顯示:用RNA干擾技術(shù)在細(xì)胞內(nèi)沉默熱休克蛋白90(Hsp90)或在AML細(xì)胞內(nèi)使用Hsp90抑制劑STA-9090后,細(xì)胞內(nèi)Ikaros的蛋白表達(dá)均發(fā)生下調(diào);同時我們發(fā)現(xiàn)STA-9090引起的細(xì)胞內(nèi)Ikaros的下調(diào)是由熱休克同源蛋白70碳末端結(jié)合蛋白(CHIP)這個E3泛素連接酶所介導(dǎo)的。進(jìn)一步的研究顯示細(xì)胞內(nèi)Ikaros基因的沉默能夠顯著抑制體內(nèi)外AML細(xì)胞的增殖。綜合以上研究,我們發(fā)現(xiàn)了細(xì)胞內(nèi)Hsp90與Ikaros的相互作用關(guān)系,并且深入探討了Hsp90抑制劑引起細(xì)胞內(nèi)Ikaros降解的具體機(jī)制。該研究有望為今后Hsp90抑制劑應(yīng)用于AML的臨床試驗提供一定的線索和理論基礎(chǔ)。急性淋巴細(xì)胞白血病(ALL)是好發(fā)于兒童和青少年的惡性血液系統(tǒng)疾病,盡管目前急性淋巴細(xì)胞白血病在兒童中治愈率可高達(dá)90%,但是該病在成人中的治愈率低,且預(yù)后差,因此,人們迫切地需要尋找新的治療方案。本論文研究顯示組蛋白去乙...

【文章頁數(shù)】：98 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
全文主要縮略語中英文對照表
第一部分 :CHIP介導(dǎo)急性髓系白血病細(xì)胞內(nèi)IKAROS的降解和相關(guān)機(jī)制研究
    第一章 :緒論
        1.1 研究背景
        1.2 本研究的主要內(nèi)容
    第二章 :HSP90抑制劑引起急性髓系白血病細(xì)胞內(nèi)IKAROS的降解
        2.1 材料與方法
            2.1.1 試劑和抗體
            2.1.2 主要儀器
            2.1.3 主要溶液配制
            2.1.4 主要實驗器具的處理
            2.1.5 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.1.6 單個核細(xì)胞分選
            2.1.7 臺盼藍(lán)拒染法檢測細(xì)胞活率
            2.1.8 基因敲除質(zhì)粒的構(gòu)建和篩選
            2.1.9 病毒的包裝和感染
            2.1.10 細(xì)胞總蛋白的提取
            2.1.11 免疫印跡(western blot)
            2.1.12 實時熒光定量PCR(Q-PCR)
            2.1.13 統(tǒng)計學(xué)分析
        2.2 結(jié)果
            2.2.1 Hsp90抑制劑引起急性髓系白血病細(xì)胞內(nèi)Ikaros的減少
            2.2.2 Hsp90抑制劑對細(xì)胞內(nèi)Ikaros mRNA的影響
            2.2.3 Hsp90抑制劑對急性髓系白血病細(xì)胞增殖和活率的影響
            2.2.4 Hsp90抑制劑不改變其他類型血液腫瘤細(xì)胞內(nèi)Ikaros蛋白的表達(dá)水平
        2.3 小結(jié)與討論
    第三章 :CHIP介導(dǎo)的急性髓系白血病細(xì)胞內(nèi)IKAROS降解的相關(guān)機(jī)制研究
        3.1 材料與方法
            3.1.1 試劑和抗體
            3.1.2 主要儀器
            3.1.3 質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染
            3.1.4 免疫熒光
            3.1.5 免疫共沉淀(co-IP)
            3.1.6 Western blot檢測蛋白表達(dá)
            3.1.7 真核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建
            3.1.8 蛋白質(zhì)截短體的構(gòu)建
            3.1.9 質(zhì)粒突變
            3.1.10 統(tǒng)計學(xué)方法
        3.2 結(jié)果
            3.2.1 細(xì)胞內(nèi)Hsp90與Ikaros的共定位
            3.2.2 細(xì)胞內(nèi)Hsp90與Ikaros的相互作用
            3.2.3 Hsp90抑制劑引起Ikaros的降解是通過泛素蛋白酶體途徑所介導(dǎo)
            3.2.4 Hsp90抑制劑并不是通過E3泛素連接酶CRBN引起AML細(xì)胞內(nèi)Ikaros的降解
            3.2.5 Hsp90抑制劑引起的Ikaros降解是通過E3泛素連接酶CHIP介導(dǎo)
            3.2.6 細(xì)胞內(nèi)CHIP和Ikaros的共定位
            3.2.7 CHIP通過TPR結(jié)構(gòu)域與Ikaros發(fā)生相互作用
            3.2.8 Hsp90抑制劑通過作用于Ikaros的N端促進(jìn)Ikaros的降解
        3.3 小結(jié)與討論
    第四章 :急性髓系白血病細(xì)胞內(nèi)IKAROS降解引起的生物學(xué)效應(yīng)
        4.1 材料與方法
            4.1.1 試劑與耗材
            4.1.2 主要儀器
            4.1.3 主要溶液配方
            4.1.4 Ikaros基因敲除質(zhì)粒的構(gòu)建和篩選
            4.1.5 細(xì)胞增殖的測定
            4.1.6 細(xì)胞周期分析
            4.1.7 動物實驗
            4.1.8 免疫組化實驗
            4.1.9 統(tǒng)計學(xué)方法
        4.2 結(jié)果
            4.2.1 AML細(xì)胞內(nèi)Ikaros敲除后對細(xì)胞增殖和細(xì)胞周期的影響
            4.2.2 AML細(xì)胞內(nèi)Ikaros敲除后在體內(nèi)對腫瘤的抑制作用
        4.3 小結(jié)與討論
    第五章 :討論
    參考文獻(xiàn)
第二部分 :SAHA聯(lián)合QC對急性淋巴細(xì)胞白血病效應(yīng)及機(jī)制研究
    第一章 :緒論
        1.1 研究背景
        1.2 本研究的主要內(nèi)容
    第二章 :SAHA聯(lián)合QC對急性淋巴細(xì)胞白血病效應(yīng)及機(jī)制研究
        2.1 材料與方法
            2.1.1 試劑和抗體
            2.1.2 主要儀器
            2.1.3 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.1.4 臺盼藍(lán)拒染法檢測細(xì)胞活率
            2.1.5 單個核細(xì)胞的分選
            2.1.6 AnnexinV-APC/PI雙染法檢測細(xì)胞凋亡
            2.1.7 Western blot(蛋白免疫印跡)
            2.1.8 細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)的檢測
            2.1.9 動物體內(nèi)實驗
            2.1.10 統(tǒng)計學(xué)方法
        2.2 結(jié)果
            2.2.1 SAHA聯(lián)合QC在急性淋巴細(xì)胞白血病病人細(xì)胞上的效應(yīng)
            2.2.2 SAHA聯(lián)合QC引起急性B淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞發(fā)生凋亡
            2.2.3 SAHA聯(lián)合QC誘導(dǎo)的B-ALL細(xì)胞凋亡與線粒體功能紊亂密切相關(guān)
            2.2.4 SAHA聯(lián)合QC具有體內(nèi)抑制急性淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞皮下移植瘤增殖的效應(yīng)
        2.3 小結(jié)與討論
    參考文獻(xiàn)
致謝
附錄一:學(xué)術(shù)論文和科研成果目錄



本文編號：3999112