基于環(huán)氧開環(huán)反應(yīng)的核酸適配體鍵合整體柱的制備及性能研究
發(fā)布時間：2024-07-10 20:29
核酸適配體穩(wěn)定性好、易修飾、可重復(fù)利用、具有高親和力和高特異性,可與特定目標(biāo)物結(jié)合,受到科學(xué)工作者越來越多的關(guān)注。本文通過環(huán)氧開環(huán)反應(yīng),將末端修飾有氨基的核酸適配體固載至表面帶有環(huán)氧基團(tuán)的整體柱上,制備了三種核酸適配體鍵合整體柱,以赭曲霉毒素A(OTA)為研究對象,開展了核酸適配體鍵合整體柱制備技術(shù)及性能研究。主要研究具體如下:第一章,文獻(xiàn)綜述。概述了親和色譜、整體柱的制備及分類和核酸適配體的特點(diǎn)、固載方式。以赭曲霉毒素A為應(yīng)用對象,提出了論文選題依據(jù)和研究方案。第二章,Aptamer@poly(GMA-co-POSS-MA)親和整體柱的制備及性能研究。以甲基丙烯酸酯縮水甘油酯(GMA)為功能單體,多面體低聚倍半硅氧烷(POSS-MA)為交聯(lián)劑,制備了表面帶有環(huán)氧基團(tuán)的固定相;通過環(huán)氧與氨基開環(huán)反應(yīng),制備了5’-氨基核酸適配體鍵合的整體柱�？疾炝司酆险w柱的形貌結(jié)構(gòu)、配方組成、機(jī)械穩(wěn)定性、重現(xiàn)性等,測定核酸適配體修飾前后整體柱電滲流和紅外光譜;考察了核酸適配體柱對OTA單樣及含有赭曲霉毒素B和黃曲霉毒素B1的混合樣進(jìn)行選擇性富集分離,所制備的核酸適配體親和柱疏水性強(qiáng),對OTA具有特異性...
【文章頁數(shù)】：92 頁
【學(xué)位級別】：碩士
【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
主要縮略詞表
第一章 緒論
1.1 概述
1.2 整體柱制備及分類
1.2.1 有機(jī)聚合整體柱
1.2.1.1 聚苯乙烯類整體柱
1.2.1.2 聚甲基丙烯酸酯類整體柱
1.2.1.3 聚丙烯酰胺類整體柱
1.2.2 無機(jī)硅膠整體柱
1.2.3 有機(jī)-無機(jī)雜化整體柱
1.3 核酸適體親和整體柱
1.3.1 親和色譜
1.3.2 核酸適配體
1.3.3 核酸適體親和整體柱制備
1.3.3.1 非共價鍵固定法
1.3.3.2 共價鍵固定法
1.4 論文的選題依據(jù)及研究內(nèi)容
第二章 Aptamer@poly(GMA-co-POSS-MA)親和整體柱的制備及性能表征
2.1 引言
2.2 實(shí)驗(yàn)部分
2.2.1 材料與試劑
2.2.1.1 試劑
2.2.1.2 材料
2.2.1.3 溶液的配制
2.2.2 儀器與設(shè)備
2.2.3 整體柱制備
2.2.3.1 石英毛細(xì)管預(yù)處理
2.2.3.2 毛細(xì)管內(nèi)壁烯基化
2.2.3.3 poly(GMA-co-POSS-MA)有機(jī)-硅膠雜化整體柱的制備
2.2.3.4 賴氨酸修飾poly(GMA-co-POSS-MA)整體柱的制備
2.2.3.5 Aptamer@poly(GMA-co-POSS-MA)親和整體柱的制備
2.2.4 實(shí)驗(yàn)方法
2.2.4.1 OTA富集洗脫檢測步驟
2.2.4.2 電滲流的計(jì)算方法
2.2.4.3 核酸適配體覆蓋密度的計(jì)算
2.2.4.4 親和整體柱OTA負(fù)載量測定
2.2.4.5 OTA標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的構(gòu)建
2.3 結(jié)果與討論
2.3.1 poly(GMA-co-POSS-MA)柱性能表征
2.3.1.1 poly(GMA-co-POSS-MA)雜化整體柱的組成優(yōu)化
2.3.1.2 機(jī)械穩(wěn)定性
2.3.1.3 重現(xiàn)性
2.3.1.4 保留作用機(jī)制
2.3.2 Aptamer@poly(GMA-co-POSS-MA)親和整體柱性能分析
2.3.2.1 SEM形貌分析
2.3.2.2 電滲流分析
2.3.2.3 紅外光譜(IR)分析
2.3.2.4 OTA特異性識別分析
2.3.2.5 混合樣品中OTA選擇性分析
2.3.3 核酸適配體親和整體柱適配體覆蓋密度
2.3.4 核酸適配體親和整體柱的最大負(fù)載量
2.3.5 核酸適配體親和整體柱檢測限
2.4 小結(jié)
第三章 Aptamer@poly(epoxy-MA-co-POSS-MA)親和整體柱的制備及性能表征
3.1 引言
3.2 實(shí)驗(yàn)部分
3.2.1 材料與試劑
3.2.1.1 試劑
3.2.2 整體柱制備
3.2.2.1 poly(epoxy-MA-co-POSS-MA)有機(jī)-硅膠雜化整體柱的制備
3.2.2.2 賴氨酸修飾poly(epoxy-MA-co-POSS-MA)整體柱的制備
3.2.2.3 Aptamer@poly(epoxy-MA-co-POSS-MA)親和整體柱的制備
3.3 結(jié)果與討論
3.3.1 poly(epoxy-MA-co-POSS-MA)柱性能表征
3.3.1.1 poly(epoxy-MA-co-POSS-MA)雜化整體柱組成優(yōu)化
3.3.1.2 機(jī)械穩(wěn)定性
3.3.1.3 重現(xiàn)性
3.3.2 核酸適配體的衍生
3.3.3 Aptamer@poly(epoxy-MA-co-POSS-MA)親和整體柱性能分析
3.3.3.1 形貌分析
3.3.3.2 電滲流分析
3.3.3.3 紅外光譜(IR)分析
3.3.3.4 保留作用機(jī)制
3.3.3.5 OTA特異性識別分析
3.3.3.6 混合樣品中OTA選擇性分析
3.3.4 不同洗脫試劑的影響
3.3.5 核酸適配體親和整體柱適配體覆蓋密度
3.3.6 核酸適配體親和整體柱的最大負(fù)載量
3.3.7 核酸適配體親和整體柱檢測限
3.4 小結(jié)
第四章 Aptamer@poly(epoxy-MA-co-PETA)親和整體柱的制備及性能表征
4.1 引言
4.2 實(shí)驗(yàn)部分
4.2.1 材料與試劑
4.2.2 整體柱制備
4.2.2.1 poly(epoxy-MA-co-PETA)有機(jī)-硅膠雜化整體柱的制備
4.2.2.2 賴氨酸修飾poly(epoxy-MA-co-PETA)整體柱的制備
4.2.2.3 Aptamer@poly(epoxy-MA-co-PETA)親和整體柱的制備
4.3 結(jié)果與討論
4.3.1 poly(epoxy-MA-co-PETA)柱性能表征
4.3.1.1 poly(epoxy-MA-co-PETA)雜化整體柱組成優(yōu)化
4.3.1.2 機(jī)械穩(wěn)定性
4.3.1.3 重現(xiàn)性
4.3.2 核酸適配體的衍生
4.3.3 Aptamer@poly(epoxy-MA-co-PETA)親和整體柱性能分析
4.3.3.1 形貌分析
4.3.3.2 電滲流分析
4.3.3.3 紅外光譜(IR)分析
4.3.3.4 保留機(jī)制的探索
4.3.3.5 核酸適配體親和整體柱色譜性能對比分析
4.3.3.6 OTA特異性識別分析
4.3.3.7 混合樣中OTA選擇性分析
4.3.4 不同核酸適配體親和整體柱對OTA特異性識別作用
4.3.5 不同核酸適配體親和整體柱適配體覆蓋密度
4.3.6 核酸適配體親和整體柱的最大負(fù)載量
4.3.7 核酸適配體親和整體柱檢測限
4.4 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
個人簡歷
在學(xué)期間已發(fā)表和錄用的論文及專利
參與的科研項(xiàng)目
本文編號：4004688
【文章頁數(shù)】：92 頁
【學(xué)位級別】：碩士
【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
主要縮略詞表
第一章 緒論
1.1 概述
1.2 整體柱制備及分類
1.2.1 有機(jī)聚合整體柱
1.2.1.1 聚苯乙烯類整體柱
1.2.1.2 聚甲基丙烯酸酯類整體柱
1.2.1.3 聚丙烯酰胺類整體柱
1.2.2 無機(jī)硅膠整體柱
1.2.3 有機(jī)-無機(jī)雜化整體柱
1.3 核酸適體親和整體柱
1.3.1 親和色譜
1.3.2 核酸適配體
1.3.3 核酸適體親和整體柱制備
1.3.3.1 非共價鍵固定法
1.3.3.2 共價鍵固定法
1.4 論文的選題依據(jù)及研究內(nèi)容
第二章 Aptamer@poly(GMA-co-POSS-MA)親和整體柱的制備及性能表征
2.1 引言
2.2 實(shí)驗(yàn)部分
2.2.1 材料與試劑
2.2.1.1 試劑
2.2.1.2 材料
2.2.1.3 溶液的配制
2.2.2 儀器與設(shè)備
2.2.3 整體柱制備
2.2.3.1 石英毛細(xì)管預(yù)處理
2.2.3.2 毛細(xì)管內(nèi)壁烯基化
2.2.3.3 poly(GMA-co-POSS-MA)有機(jī)-硅膠雜化整體柱的制備
2.2.3.4 賴氨酸修飾poly(GMA-co-POSS-MA)整體柱的制備
2.2.3.5 Aptamer@poly(GMA-co-POSS-MA)親和整體柱的制備
2.2.4 實(shí)驗(yàn)方法
2.2.4.1 OTA富集洗脫檢測步驟
2.2.4.2 電滲流的計(jì)算方法
2.2.4.3 核酸適配體覆蓋密度的計(jì)算
2.2.4.4 親和整體柱OTA負(fù)載量測定
2.2.4.5 OTA標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的構(gòu)建
2.3 結(jié)果與討論
2.3.1 poly(GMA-co-POSS-MA)柱性能表征
2.3.1.1 poly(GMA-co-POSS-MA)雜化整體柱的組成優(yōu)化
2.3.1.2 機(jī)械穩(wěn)定性
2.3.1.3 重現(xiàn)性
2.3.1.4 保留作用機(jī)制
2.3.2 Aptamer@poly(GMA-co-POSS-MA)親和整體柱性能分析
2.3.2.1 SEM形貌分析
2.3.2.2 電滲流分析
2.3.2.3 紅外光譜(IR)分析
2.3.2.4 OTA特異性識別分析
2.3.2.5 混合樣品中OTA選擇性分析
2.3.3 核酸適配體親和整體柱適配體覆蓋密度
2.3.4 核酸適配體親和整體柱的最大負(fù)載量
2.3.5 核酸適配體親和整體柱檢測限
2.4 小結(jié)
第三章 Aptamer@poly(epoxy-MA-co-POSS-MA)親和整體柱的制備及性能表征
3.1 引言
3.2 實(shí)驗(yàn)部分
3.2.1 材料與試劑
3.2.1.1 試劑
3.2.2 整體柱制備
3.2.2.1 poly(epoxy-MA-co-POSS-MA)有機(jī)-硅膠雜化整體柱的制備
3.2.2.2 賴氨酸修飾poly(epoxy-MA-co-POSS-MA)整體柱的制備
3.2.2.3 Aptamer@poly(epoxy-MA-co-POSS-MA)親和整體柱的制備
3.3 結(jié)果與討論
3.3.1 poly(epoxy-MA-co-POSS-MA)柱性能表征
3.3.1.1 poly(epoxy-MA-co-POSS-MA)雜化整體柱組成優(yōu)化
3.3.1.2 機(jī)械穩(wěn)定性
3.3.1.3 重現(xiàn)性
3.3.2 核酸適配體的衍生
3.3.3 Aptamer@poly(epoxy-MA-co-POSS-MA)親和整體柱性能分析
3.3.3.1 形貌分析
3.3.3.2 電滲流分析
3.3.3.3 紅外光譜(IR)分析
3.3.3.4 保留作用機(jī)制
3.3.3.5 OTA特異性識別分析
3.3.3.6 混合樣品中OTA選擇性分析
3.3.4 不同洗脫試劑的影響
3.3.5 核酸適配體親和整體柱適配體覆蓋密度
3.3.6 核酸適配體親和整體柱的最大負(fù)載量
3.3.7 核酸適配體親和整體柱檢測限
3.4 小結(jié)
第四章 Aptamer@poly(epoxy-MA-co-PETA)親和整體柱的制備及性能表征
4.1 引言
4.2 實(shí)驗(yàn)部分
4.2.1 材料與試劑
4.2.2 整體柱制備
4.2.2.1 poly(epoxy-MA-co-PETA)有機(jī)-硅膠雜化整體柱的制備
4.2.2.2 賴氨酸修飾poly(epoxy-MA-co-PETA)整體柱的制備
4.2.2.3 Aptamer@poly(epoxy-MA-co-PETA)親和整體柱的制備
4.3 結(jié)果與討論
4.3.1 poly(epoxy-MA-co-PETA)柱性能表征
4.3.1.1 poly(epoxy-MA-co-PETA)雜化整體柱組成優(yōu)化
4.3.1.2 機(jī)械穩(wěn)定性
4.3.1.3 重現(xiàn)性
4.3.2 核酸適配體的衍生
4.3.3 Aptamer@poly(epoxy-MA-co-PETA)親和整體柱性能分析
4.3.3.1 形貌分析
4.3.3.2 電滲流分析
4.3.3.3 紅外光譜(IR)分析
4.3.3.4 保留機(jī)制的探索
4.3.3.5 核酸適配體親和整體柱色譜性能對比分析
4.3.3.6 OTA特異性識別分析
4.3.3.7 混合樣中OTA選擇性分析
4.3.4 不同核酸適配體親和整體柱對OTA特異性識別作用
4.3.5 不同核酸適配體親和整體柱適配體覆蓋密度
4.3.6 核酸適配體親和整體柱的最大負(fù)載量
4.3.7 核酸適配體親和整體柱檢測限
4.4 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
個人簡歷
在學(xué)期間已發(fā)表和錄用的論文及專利
參與的科研項(xiàng)目
本文編號：4004688
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