發(fā)布時(shí)間：2018-11-08 13:03

【摘要】：提出了重組畢赤酵母工程菌p PICZ-DT30/GS115基因組中外源基因DT30拷貝數(shù)的實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法。該重組工程菌用來表達(dá)人胰島素前體(PI-DT30),其表達(dá)量的高低、菌種穩(wěn)定性對(duì)工藝研究及整體項(xiàng)目成本等有重大影響。外源基因拷貝數(shù)是檢測(cè)表達(dá)量的一個(gè)重要指標(biāo)。該方法中,利用畢赤酵母的看家基因GAP(Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase)為內(nèi)參,分別建立含GAP基因和DT30基因的雙標(biāo)準(zhǔn)曲線。將工程菌基因組進(jìn)行熒光定量PCR,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線和Ct值計(jì)算目的基因DT30在重組畢赤酵母工程菌中的拷貝數(shù),結(jié)果為7個(gè)。
[Abstract]:A real-time fluorescence quantitative PCR (PCR) method for DT30 copy number of recombinant Pichia pastoris (Pichia pastoris) genome was proposed. The recombinant engineering strain was used to express human insulin precursor (PI-DT30). The level of expression and the stability of bacteria species had great influence on the technological research and overall project cost. The copy number of exogenous gene is an important index to detect the quantity of expression. In this method, the double standard curve containing GAP gene and DT30 gene was established by using the housekeeping gene GAP (Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase) of Pichia pastoris as internal reference. The copy number of target gene DT30 in recombinant Pichia pastoris was calculated by fluorescence quantitative PCR, according to standard curve and Ct value. The result was 7.
【作者單位】： 重慶理工大學(xué)藥學(xué)與生物工程學(xué)院;重慶富進(jìn)生物醫(yī)藥有限公司;
【分類號(hào)】：Q933

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