發(fā)布時間：2025-02-11 17:49

　　目的:通過特異的si RNA構建Sp110表達降低的細胞模型,在此基礎上研究Sp110對結核桿菌感染后的巨噬細胞的影響,以便為促進抗結核基因的轉(zhuǎn)基因合成以及發(fā)現(xiàn)治療結核病的新方法奠定基礎。方法:利用Lipofectamin TM3000 Reagent包裹si RNA對巨噬細胞進行轉(zhuǎn)染,進行實時熒光定量PCR檢測RAW264.7細胞中Sp110基因m RNA水平的表達量,對細胞進行總蛋白的提取,利用Western Blot方法檢測轉(zhuǎn)染后巨噬細胞中SP110蛋白的表達情況。成功構建Sp110低表達的巨噬細胞后,分別用BCG、H37Ra感染巨噬細胞,于感染6 h后對細胞進行清洗,去除細胞外的結核桿菌并將此時記為0h。利用抗酸染色分析巨噬細胞吞噬結核桿菌的情況,選取0 h、24 h、48 h、72 h四個時間段繪制細胞生長曲線以了解增殖情況,利用流式細胞術分析細胞死亡情況。結果:(1)si RNA轉(zhuǎn)染24h后,陰性對照組細胞形態(tài)與空白對照相比未發(fā)生明顯變化,細胞胞體呈圓形,折光性強,胞內(nèi)顆粒少;si RNA組細胞胞體出現(xiàn)觸角,胞漿中黑色顆粒增多;(2)經(jīng)轉(zhuǎn)染si RNA24 h后,與空白對照組...

【文章頁數(shù)】：45 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖1RAW264.7細胞形態(tài)變化（×100）

Sp110基因沉默對巨噬細胞抗結核分枝桿菌的影響及功能研究14結果1.siRNA轉(zhuǎn)染24h后RAW264.7細胞變化在細胞進行siRNA轉(zhuǎn)染24h后，觀察細胞形態(tài)，結果可見三組的細胞數(shù)量接近，沒有明顯的改變，NC組細胞形態(tài)相較于Control組未發(fā)生明顯變化，顯微鏡下可見細胞的胞....

圖3Sp110基因?qū)�細胞中SP110蛋白表達的影響

Sp110基因沉默對巨噬細胞抗結核分枝桿菌的影響及功能研究150.001）。NC組與Control組相比蛋白表達量雖然有些許增加但無統(tǒng)計學意義（P>0.05）（見圖3）。（a）（b）圖3Sp110基因?qū)�細胞中SP110蛋白表達的影響Figure3InfluenceofSp110g....

圖4結核桿菌感染RAWFigure4RAW264.7cellsinfectedby注：圖A與圖B組為BCG感染的NC-1組和siRNA-1組

Sp110基因沉默對巨噬細胞抗結核分枝桿菌的影響及功能研究150.001）。NC組與Control組相比蛋白表達量雖然有些許增加但無統(tǒng)計學意義（P>0.05）（見圖3）。（a）（b）圖3Sp110基因?qū)�細胞中SP110蛋白表達的影響Figure3InfluenceofSp110g....

本文編號：4033629